L'effet du NaCl sur la croissance et la bioluminescence de la bactérie
Expérimentation
1) Protocole expérimental.
J'ai mesuré la densité optique (DO) avec le spectrophotomètre à 600nm pour évaluer l'évolution de la croissance microbienne den fonction du sel. j'ai donc utilisé deux types de sels :
- Le NaCl pur (99,5%)
- Le sel marin Instant ocean. ( 85% de NaCl)
J'ai donc mis 200 µL d'une suspension mère de la souche de photobactéries Rattail bioluminescente et 10mL de bouillon de culture avec du NaCL et avec du sel marin pour comparer l'efficacité de ces deux milieux de culture. J'ai ensuite mesuré la DO toutes les heures.
On a utilisé des cuves en polystyrène et le spectrophotomètre biochrom portable. On a fait le blanc avec les milieux et on a mesuré la DO des bactéries toutes les heures.
2) Résultats
| Temps (heure) | DO sel marin | DO NaCl |
| 1 | 0,030 | 0,014 |
| 3 | 0,082 | 0,042 |
| 4 | 0,164 | 0,081 |
| 5 | 0,247 | 0,147 |
| 6 | 0,303 | 0,194 |
| 7 | 0,368 | 0,267 |
| 8 | 0,457 | 0,316 |
Tableau 1: Mesure de la DO le 17/04/2025 en partant de la suspension mère de 42h d'incubation.
| Temps (heure) | DO sel marin | DO NaCl |
| 1 | 0,022 | 0,017 |
|
2 |
0,054 | 0,030 |
| 4 | 0,154 | 0,082 |
| 5 | 0,210 | 0,134 |
| 6 | 0,240 | 0,170 |
| 7 | 0,301 | 0,221 |
Tableau 2 : Mesure de la DO le 18/04/2025 en partant de la suspension mère de 66h d'incubation.
3) Discussion
3.1) Croissance microbienne
On observe que la DO est plus élevée avec le sel marin ce qui indique que ce sel est plus favorable à la croissance de la bactérie que le NaCl pur. Le sel marin est riche en différents sels minéraux (figure 1) ce qui doit être plus favorable à la croissance microbienne. En traçant la courbe sur Excel , on obtient une droite sans mettre les valeurs en logarithme. Le temps de génération de la bactérie est plus longue qu'une 1h il faudrait donc mesurer les DO toutes les 2h pour pouvoir tracer une courbe de croissance.
Figure : 1 composition du sel marin
3.2) Bioluminescence
J'ai comparé l'intensité de bioluminescence. à 4h on commence à voir une bioluminescence mais qui est pale. on atteint le maximum de la bioluminescence au bout de 7h. Au bout de 17h, on remarque une intensité de bioluminescence plus importante avec le NaCl qu'avec le sel marin mais la différence est moins visible après 7h d'incubation. Il n'y a pas de corrélation entre croissance et bioluminescence. En effet, quand la DO est plus élevée en présence avec le sel marin qu'avec le NaCl alors qu'à l'inverse la bioluminescence est plus élevée en présence de NaCl. On rappel que le sel marin est à 85% de NaCl là ou le NaCl en poudre est à 99,5% de pureté.
Figure 2 : Bioluminescence de Rattail sur milieu solide (17h). Figure 3 : Bioluminescence de de Rattail sur milieu liquide (17h
Figure 4: Bioluminescence de Rattail sur milieu liquide (7h).
Expérimentation 2
1) Protocole expérimental
J'ai lancé deux cultures de bactérie :
- 200µL de bactéries + 10mL de milieu classique
- 200 µL de la suspension bactérienne + 10mL de milieu avec du NaCl
J'ai mesuré la DO toutes les heures à 600nm au spectrophotomètre portable biochrom.
2) Résultats
| DO avec le Nacl | DO avec le sel marin | ||
|
DO 1h= 0,067 |
DO 1h=0,084 | ||
| DO 2h= 0,079 |
DO 2h= 0,100 |
||
| DO 3h= 0,094 | DO 3h= 0,124 | ||
| DO 4h= 0,131 | DO 4h= 0,156 | ||
| DO 5h= 0,190 | DO 5h= 0,230 | ||
| DO 6h= 0,272 | DO 6h= 0,326 | ||
| DO 7h= 0,363 | DO 7h= 0,470 |
3) Discussion
La tendance se confirme. Le NaCl ralenti la croissance de la bactérie. Cependant, on observe que la bactérie a une intensité de bioluminescence plus élevée en présence de NaCl. On peut supposer que le Nacl a 99% de pureté induit un stress à la bactérie ce qui doit augmenter l'activité de la luciférase bactérienne.
Expérimentation 3
1) Bibliographie
Des chercheurs malaisiens ont testé des concentrations de NaCl sur la bactérie photobacterium sp. Ils ont mesurés la bioluminescence de la bactérie en fonction de différentes concentrations de NaCl : 5g/L, 10g/L, 15g/L, 20g/L, 30g/L, 40 gl/L et 50g/L .
2) Protocole expérimental
J'ai préparer des milieux classiques aux concentration de NaCl de 10g/L, 20g/L, 30 g/l et 40g/L. Ces milieux ont été autoclavés. J'ai ensuite préparé 5 petits erlenmeyer dans lequel j'ai mis 200 µL de suspension bactérienne dans 10 mL de milieu. J'ai également lancé une culture avec 10ml de milieu sel marin et 200µL de suspension bactérienne.
3) Résultats
Figure 1: la bioluminescence de la bactérie en fonction de la concentration en Nacl
| Le milieu utilisé | Intensité de la bioluminescence |
| Nacl 10g/L | 0 |
| Sel marin | + |
| NaCl 20g/L | + |
| NaCl 30g/L | +++ |
| NaCl 40g/L | +++ |
4) Discussion
Nous avons obtenu des résultats différentes de la littérature. En effet, à 10g/L nous obtenons aucune bioluminescence. En revanche à 40g/L, la bioluminescence est très élevée contrairement à la littérature où ils ont obtenus aucune bioluminescence. Ces différences peuvent s'expliquer par le fait que nous ne manipulons pas la même espèce de photobactrium que dans la littérature et que la composition du milieu utilisé dans la littérature est différente.