Bactérie bioluminescente : Littérature et paramètres de culture. Pour étudier la bactérie bioluminescente, je me suis plongé dans le livre de Raphaël Dubois "la lumière et la vie". On nous apprend que la bactérie bioluminescente du genre photobacterium a des conditions de croissance particulière : La T°C : En effet, nous savons qu'à 12°C la température du photobacterium est optimale, à 20°C la bactérie se multiplie bien, entre 30°C et 50°C la bactérie ne se multiplie pas. Le pH: le pH doit être légèrement alcalin ( pH=7,5). quand le pH est acide, la bioluminescence de la bactérie disparait. Nous pouvons le tester en ajouter de l'acide sulfurique. La bactérie se développe en aérobie. en présence de gaz neutre tel que l'azote ou l'hydrogène, la bioluminescence persiste mais finit par disparaitre. D'après la littérature, il n'y a pas de corrélation entre la bioluminescence et la croissance de la bactérie. Ce n'est pas parce que la bactérie n'émet pas de bioluminescence qu'elle ne se multiplie pas. Nous avons travaillé avec la souche rattail dans un milieu préparé par un laboratoire partenaire. Ingrédient Quantité Unité Eau distillée 1000 mL Sel marin 30 g Levure 3 g Glycérol 3 mL Agar 15 g Asparagine 10 g Dans la littérature, le milieu utilisé pour la culture des photobactéries est différent en terme de concentration pour le glycérol (1%) para rapport à notre milieu (0,3%). De plus, les levures sont remplacés par le phosphate de potassium. Ingrédient Quantité Unité Eau commune 1000 mL Sel marin 30 g Glycérol 10 mL Phosphate de potassium 0,01 g Asparagine 10 g Sur la souche qu'on veut travailler, on veut vérifier différents paramètres de culture : La concentration en asparagine ( de 0,1% à 1%) Le sel utilisé (sel marin ou NaCl). La concentration de glycérol ( 0,3% et 1%). Remplacer la levure par le phosphate de potassium. Le genre Photobacterium regroupe des bactéries gram-négatives, souvent marines, certaines bioluminescentes, et appartenant à la famille des Vibrionaceae. Elles sont largement utilisées dans la recherche, notamment pour leurs propriétés lumineuses (ex: Photobacterium phosphoreum, Photobacterium leiognathi). Conditions générales de culture Paramètre Détail Type Bactérie aérobie ou microaérophile, parfois facultativement anaérobie Température optimale 20–30 °C (en général, mésophile, mais certaines espèces marines préfèrent 15–25 °C) pH optimal 7,0 – 8,5 Salinité Environnement marin ou légèrement salin nécessaire : 2–3 % NaCl (souvent indispensable) Oxygène Aérobie stricte ou facultative selon l'espèce Milieu solide Milieux adaptés : Marine Agar (Zobell 2216E) : standard pour bactéries marines. TSA (Tryptic Soy Agar) + 2–3 % NaCl : milieu enrichi et modulable. LB Agar + 2–3 % NaCl : bon pour croissance générale, moins exigeant. Conditions : Incubation à 20–30 °C. 24 à 48 h pour développement visible. Certaines espèces bioluminescentes nécessitent une observation à l’obscurité. Milieu liquide Milieux recommandés : Marine Broth (Zobell 2216E liquide) ou LB Broth + NaCl. Ajouter 2–3 % NaCl pour imiter l’eau de mer. Pour des cultures à long terme ou croissance rapide : agitation modérée (150–200 rpm). Conditions : Incubation à 20–30 °C. Agitation pour aération (pour espèces aérobies). Suivi de croissance possible par turbidimétrie (OD600). Bibliographie: 1 Milieu solide https://www.atcc.org/ 2 Milieu liquide https://www.ncbi.nlm.nih.gov/3 BACTERIE PHOSPHOREUM Titre: OPTIMUM CULTURAL CONDITIONS FOR STRONG LIGHT PRODUCTION BY PHOTOBACTERIUM PHOSPHOREUM NOBUYOSHI MAKIGUCHI, MASANOBU ARITA, AND YOSHIYUKI ASAI Source: https://www.jstage.jst.go.jp/article/jgam1955/26/2/26_2_75/_pdf/-char/ja =>Voir l'effet de la variation de certains paramètres sur la bioluminescence des bactéries Photobacterium phosphoreum MT-10201 isolé d'un organe lumineux d'un poisson Physiculus japonicus (pH, température, NaCl...). Voici le milieu "optimal" selon cet article. Ingrédient Quantité Unité Eau distillé 1000 mL Glycérol 1 g Polypepton 10 g Extrait de viande 3 g NaCl 30 g Agar 15 g pH 7,3 Leurs tableau font apparaître des maxima d'intensité lumineuse pour certaines concentrations : NaCl à 3% - pH à 8,5 - +0,1% d'acide malique - vitesse d'agitation à 500rpm (dans un fermenteur de 20L). 4 BACTERIE FISCHERI Source: https://journals.asm.org/doi/10.1128/jb.95.3.975-979.1968 Plein d'espèces sur cet article https://revistes.iec.cat/index.php/IM/article/download/143152/142011/0