L-Asparagine vs peptone : effets sur la croissance et la bioluminescence
Introduction
Dans de nombreux articles scientifiques portant sur les espèces du genre Photobacterium, l’utilisation de peptone est souvent préférée à celle de la L-Asparagine dans la préparation des milieux de culture.
Afin de comparer l’impact de ces deux composés, nous allons étudier deux colonies d’une même espèce de Photobacterium cultivées dans deux milieux différents.
Ces milieux reprennent la composition décrite dans la page de référence sur les paramètres de culture.
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Le milieu 1 suit exactement cette composition, avec de la L-Asparagine (10g/L).
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Le milieu 2 en diffère uniquement par le remplacement de la L-Asparagine par de la peptone, dans les mêmes proportions (10g/L)
Nous procéderons d’abord à une analyse spectrométrique d’absorption, puis à une analyse de luminescence afin d’évaluer les différences éventuelles de croissance et d’activité métabolique entre les deux conditions.
Protocole:
Nous préparons deux échantillons:
- Dans l'échantillon 1, on introduit 200 µl de culture de bactéries et 10 ml du milieu 1
- Dans l'échantillon 2, on introduit 200 µl de culture de bactéries et 10 ml du milieu 2
Nous introduisons ensuite les échantillons dans des cuves de spectrométrie.
Deux cuves supplémentaires, contenant respectivement uniquement le milieu 1 et uniquement le milieu 2, servent de blancs pour les mesures d’absorbance de leur échantillon associé.
L’heure d’inoculation est notée, et des mesures d’absorbance sont réalisées toutes les heures, à partir de 1 heure après l’inoculation.
Résultats:
On note :
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A₁ : l’absorbance de l’échantillon 1 (milieu avec L-Asparagine)
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A₂ : l’absorbance de l’échantillon 2 (milieu avec peptone)
| Temps (heures) | A₁ (UA) | A₂ (UA) |
| 1 | 0.118 | 0.094 |
| 2 | 0.151 | 0.146 |
| 3 | 0.206 | 0.216 |
| 5 | 0.367 | 0.464 |
| 6 | 0.417 | 0.565 |
| 7 | 0.452 | 0.608 |
| 8 | 0.481 | 0.663 |
Pour la facilité de lecture, les données sont tracées sur le graphe suivant:
Intensité de bioluminescence après 7h:
La mesure à été faite sur le luminomètre Berthold Sirius FB12. Nous faisons les mesures à 3 reprises pour chaque échantillon:
- Sans dilution
- Dilué au 10e
A blanc, on obtient une valeur autour de 21 RLU/s.
Les échantillons non dilués provoquent un overload de l'appareil, d'où la nécessité de faire des échantillons dilués.
Pour les échantillons dilués au 10e, nous obtenons les valeurs suivantes:
- L'échantillon 1 (L-Asparagine) : 1,961,614 RLU/s
- L'échantillon 2 (Peptone) : 3,247,180 RLU/s