Culture de Dunaliella


Mortain‐Bertrand, Anne, et al. « A METHOD FOR THE CRYOCONSERVATION OF DUNALIELLA SALINA (CHLOROPHYCEAE): EFFECT OF GLYCEROL AND COLD ADAPTATION1 ». Journal of Phycology, vol. 32, no 2, avril 1996, p. 346‑52. DOI.org (Crossref),
https://doi.org/10.1111/j.0022-3646.1996.00346.x.

Source: Chat GPT et article
Voici un protocole détaillé de cryoconservation de Dunaliella salina en laboratoire, adapté aux moyens standards (congélation à -80 °C ou azote liquide si disponible).

🧪 Protocole de cryoconservation de Dunaliella salina
📋 Matériel nécessaire

Culture saine et exponentielle de D. salina

Milieu de culture (ex. : F/2 ou Johnson avec 20–25 % NaCl)

Cryoprotecteur : Glycérol (10 %) ou DMSO (5–10 %)

Tubes cryogéniques stériles (1,8 ou 2 mL)

Glace ou bain de refroidissement (alcool + glace carbonique)

Congélateur à -80 °C ou cuve d’azote liquide (-196 °C)

Pipettes stériles

Boîte isotherme si transport entre étapes

🔬 Étapes du protocole
1. Préparation de la culture

Prélever une culture saine de Dunaliella salina en phase exponentielle (dense, bien verte/rosée selon la souche).

Centrifuger doucement si nécessaire (ex. : 2500 g, 5 min) pour concentrer la biomasse, puis resuspendre dans un volume réduit de milieu.

2. Ajout du cryoprotecteur

Mélanger le cryoprotecteur au milieu de culture :

Exemple : 900 µL de culture + 100 µL de glycérol pur (pour atteindre 10 %)

Bien homogénéiser (éviter la formation de bulles).

💡 Travailler rapidement pour éviter un choc osmotique prolongé.

3. Aliquotage

Distribuer dans des tubes cryogéniques stériles (1,5 à 2 mL max/tube).

Fermer hermétiquement.

4. Refroidissement progressif

Placer les tubes dans un système de refroidissement contrôlé :

Idéal : boîte de congélation progressive (ex. : Nalgene™ Mr. Frosty) → -1 °C/min

Alternatif : refroidir les tubes dans un bloc de polystyrène au congélateur -80 °C pendant 2–4 h

5. Stockage

Une fois à -80 °C, transférer :

Soit dans un congélateur -80 °C (conservation correcte jusqu’à 2–3 ans)

Soit dans de l’azote liquide pour stockage long terme (>10 ans)

🌱 Décongélation et reprise

Sortir le tube et le plonger rapidement dans un bain-marie à 37 °C (30–60 s).

Dès que la glace est fondue, transférer immédiatement dans un tube contenant du milieu frais à température ambiante.

Laisser se réacclimater à la lumière faible et température douce (20–25 °C) pendant quelques jours.

Observer la reprise de la croissance (microscopie ou turbidité visuelle).

✅ Notes importantes

Toujours étiqueter clairement chaque tube (nom de souche, date, cryoprotecteur utilisé).

Ne jamais recongeler un échantillon déjà décongelé.

Pour chaque souche, garder au moins 3 tubes de secours.