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====== L'élevage de Drosophila melanogaster ======

===== Présentation de l'organisme =====

La mouche du vinaigre //Drosophila melanogaster// est un insecte holométabole (//i.e.// à métamorphose complète) de l'ordre des diptères. A la suite des travaux de Thomas Hunt Morgan au début du XXème siècle, cet organisme est devenu un organisme modèle en biologie et en génétique et son génome a été totalement séquencé en 2000. Son génome comporte 180 méga-bases réparties en 4 paires de chromosomes ( 3 autozomes et 1 sexuel). On retrouve environ 13 000 gènes qui font en moyenne 10 kilo-bases. L'une des particularités de la drosophile est l'absence de crossing-over chez les mâles. On retrouve également une transgenèse aléatoire via l'élément P (transposon). 

{{ :wiki:tutoriels:droso.jpg|}}Cet insecte présente une durée de vie de 30 jours et un temps de génération d'une dizaine de jour à 25°C. L’embryogenèse (division et gastrulation) dure environ 24h. Le stade larvaire est divisé par 3 stades (L1, L2 et L3) dure 4 jours environs. Les stades L1 et L2 vivent enfouis dans le substrat et dure chacun un jour. Lorsque la larve atteint le stade L3, elle va sortir du substrat et errer jusqu'à un endroit pour se métamorphoser. La larve va alors se transformer en pupe et va réaliser sa métamorphose, ce stade dure 5 jours. Après cela, une drosophile adulte sort et va pouvoir se reproduire. 

Cet organisme présente plusieurs avantages : 
  * Le cycle de développement est court avec beaucoup de descendants 
  * L'élevage est simple (faibles coûts et faible encombrement)
  * Possibilité de croisements contrôlés et de mutagenèses
  * Nombreuses collections de mutants 
  * Génome connu, compact et assez bien annoté
  * On a 67% d’homologie entre le protéome de l'Homme et de la drosophile
  * 75% des gènes identifiés dans des maladies humaines ont un ou plusieurs homologues chez la drosophile

On retrouve toutefois trois inconvénients majeurs à l'utilisation de la drosophile comme modèle biologique : 
  * On ne sait congeler cet organisme à aucun stade de développement. Pour conserver les lignées, il faut donc les maintenir en vie.
  * L'inactivation ciblée des gènes par recombinaison homologue est difficile et peu efficace
  * C'est un organisme trop éloigné de l'Homme pour étudier les processus physiologiques. 

===== L'élevage =====

L'élevage de cet organisme se fait dans des flacons contenant un fond de milieu de culture pour la ponte et les larves. 

==== Réalisation du milieu de culture ====

Il est possible d'acheter des milieux de culture prêt à l'emploi dans le commerce ou de le réaliser simplement. 

//__Matériel nécessaire :__//
  * 76 g de farine de maïs
  * 98 g de saccharose
  * 20 g de levure sèche
  * 15 g d'agar-agar
  * 750 mL d'eau distillée

Dissoudre dans l'eau le sucre puis ajouter l'agar-agar. Chauffer l'eau et mélangeant pour le dissoudre. Ajouter la farine et la levure mélangée au préalable. Bien mélanger le tout puis autoclaver le milieu. 

Le milieu de culture doit ensuite être stocké au froid. 

Il est possible d'ajouter un anti-fongique pour éviter une contamination du milieu de culture. 

==== Préparation des tubes d'élevages ====

Une fois votre milieu de culture préparé, il faut le couler dans les tubes d'élevages. Autoclaver le milieu pour le stériliser et le rendre liquide. Verser le milieu dans les tubes pour avoir une couche de 1 à 2 cm dans chaque tube. Attendre que le milieu se solidifie puis faire sécher le tube à l'envers pour éviter la formation d'une couche de condensation à la surface du milieu.

Anesthésier les adultes et les sexer. Pour cela il faut transférer les mouches dans un tube ne contenant pas de milieu de culture. Placer le tube sur de la glace jusqu'à ce que les mouches soient endormies. Transférer les mouches sur une boite de pétri en verre placée sur de la glace. A l'aide d'une loupe binoculaire, séparer les mâles et les femelles puis placer dans chaque tube 5 mâles et 5 femelles en utilisant un pinceau humide. 

Laisser les mouches se réveiller en plaçant le tube à l'horizontal pour éviter que les mouches ne se collent au substrat. Une fois réveillées, placer les mouches à 25°C.

Lorsque vous observez les premières larves, vous pouvez retirer les adultes des tubes.
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