====== Construction d'un électrophorèse pour faire migrer de l'ADN amplifié par PCR ====== Porteur du projet [[:wiki:utilisateurs:emmanuel|Emmanuel]] (contact : [[emmanuel.thiery@pmclab.fr|emmanuel.thiery@pmclab.fr]]) ==== Source ==== Electrophorèse DIY [[http://www.instructables.com/id/Gel-electrophoresis-system-mini/?ALLSTEPS|http://www.instructables.com/id/Gel-electrophoresis-system-mini/?ALLSTEPS]] ==== Machines utilisées ==== {{http://www.distriedal.com/trotecwpress/wp-content/uploads/2014/02/Speedy100-laser-sistema-aspiracion.jpg?direct&200}}\\ - découpe laser (30×60 cm) (Ici trotec speedy 100) avec du plexiglace ou équivalent (3 mm d'épaisseur)\\ {{http://s.3dnatives.com/imprimante/replicator-2x.jpeg?direct&200}}\\ - imprimante 3D (Ici makerboot replicator 2X ou Ultimaker²) avec PLA ou ABS ==== Matériel nécessaire ==== {{http://pmclab.fr/dokuwiki/lib/exe/fetch.php?media=wiki:projets:capture_d_e_cran_2015-03-19_a_15.49.44.png?direct&200}}\\ un peignes 18 trous pour le gel trou 7,5 cm de longueur en plastique (imprimable en 3D) : {{http://s1.lmcdn.fr/multimedia/bf4702089/8b1250c76b4e/produits/silicone-en-cartouche-blanc-280-ml-rubson.jpg?direct&200}}\\ Du silicone pour assurer l'étanchéité {{http://cfnewsads.thomasnet.com/images/medium/832/832752.jpg?direct&200}}\\ De la colle pour fixer solidement du plastique (ici du cynaoacrylate) ==== Logiciel nécessaire ==== {{http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/97/OpenSCAD-logo.png/200px-OpenSCAD-logo.png?direct&100}}\\ [[http://www.openscad.org/downloads.html|Openscad (gratuit))]] {{http://media.digikey.com/photos/Keystone Elect Photos/655_sml.jpg?direct&200}}\\ 2 banana plug ==== Construction ==== === Construction de la boite === télécharger ces pdf et les découper avec la découpe laser:\\ [[https://docs.google.com/a/symbiose6.fr/file/d/0B-7mZqXURJ88UzRYZURVQWlqUlk/edit|lasercut_electro1.pdf]]\\ [[https://docs.google.com/a/symbiose6.fr/file/d/0B-7mZqXURJ88N0Z3S280UVlCV0U/edit|lasercut_electro2.pdf]]\\ [[https://docs.google.com/a/symbiose6.fr/file/d/0B-7mZqXURJ88TTFzQmJEajVxT00/edit|lasercut_electro3.pdf]]\\ [[https://docs.google.com/a/symbiose6.fr/file/d/0B-7mZqXURJ88bTJoNHBwR3hSS28/edit|lasercut_electro4.pdf]] **Ou** ce fichier qui permet de faire un boitier beaucoup plus petit, ce qui permet d'utiliser moins de liquide : [[https://drive.google.com/open?id=0B0XTckGV4ayPSWVBbWJ4MGdQOTg|https://drive.google.com/open?id=0B0XTckGV4ayPSmowZDBUZkpBYVE]] découper également deux rectangles de 3×18 cm numérotés 13 et également un rectangle de 9,8×1,2 cm d'épaisseur noté 14 Imprimer à l'impression 3d ce code Openscad : cube ([75,10,2]); // gros parallélépipède rectangle difference() { // création des 18 dents cube ([75,18,1]); translate ([-2,10,-2]) cube ([5,10,4]); translate ([5,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([9,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([13,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([17,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([21,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([25,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([29,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([33,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([37,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([41,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([45,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([49,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([53,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([57,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([61,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([65,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([69,10,-2]) cube ([2,10,4]); translate ([73,10,-2]) cube ([6,10,4]); } Pour cela, copier coller ce code dans openscad, puis faite F6, puis exporter en format stl que vous ouvrirez avec le logiciel de votre imprimante 3D (ici makerboot replicator 2X) {{:wiki:projets:lasercut_electro1.jpg?200 }}{{:wiki:projets:lasercut_electro2.jpg?200}}\\ {{:wiki:projets:lasercut_electro3.jpg?200}}{{:wiki:projets:lasercut_electro4.jpg?200}} Assembler les pièces avec la colle en vous aidant de ces images :\\ {{:wiki:projets:aassemblage_e1.jpg?400}}{{:wiki:projets:assemblage_e2.jpg?400}}\\ {{:wiki:projets:assemblage_e4.jpg?400}}\\ Percer les 4 pièces 12 afin de passer ultérieurement un fil électrique. Mettre les fils et les coller avec de la colle classique (pistolet à colle par exemple).\\ Mettre les plug banana, souder l'intérieur\\ {{:wiki:projets:soudagefil.jpg?200}}Mettre les plug banana, souder l'intérieur {{:wiki:projets:assemblage_e3.jpg?400}} Mettre du silicone dans les jointures, laisser sécher 2 heures environs. Puis, tester l'étanchéité en le remplissant d'eau. Si de l'eau s'écoule, rajouter du silicone au niveau de la formation des bulles Mettre également du silicone sur les plaques 13 {{:wiki:projets:assemblage_e5.jpg?400}} Coller le peigne en plastique sur 14 (ici 14 est en bois mais cela n'a pas d'importance).\\ {{:wiki:projets:assemblage_e6.jpg?400}} L'idée est d'assembler de la manière suivante les 13 avec {8,11,12} avec un serre joint. Il faut que cette configuration soit étanche, car on va mettre le gel d'agarose liquide qui met environ 20 minute à ce solidifier. {{:wiki:projets:assemblage_e7.jpg?400}} ==== Utilisation ==== 1. Mettre les pièces 13 et {8,11,12} avec le serre joint comme sur la photo précédente, en n'oubliant pas de mettre le peigne. (le volume de migration est environ 50 mL, le volume total de l’électrophorèse est un peu en dessous d'un demi litre)\\ 2. Couler le gel d'agarose.\\ 3. Attendre 20 minutes.\\ 4. retirer le serres joints et les 13 et mettre la boite comme indiquée sur la photo (photo à suivre)\\ 5. remplir avec le TEA pour immerger le gel\\ 6. Retirer le peigne\\ 7. mettre l'adn dans les trous\\ 8. brancher l'alim comme sur la photo\\ 9. Attendre environ 10 minutes