Cet atelier est une introduction à la culture de plante in vitro. Il a pour objectif de faire germer des graines d'Arabidopsis thaliana, d'apprendre l'utilisation du matériel et les bons réflexes de laboratoire.
Nous allons préparer un milieu de culture appelé Murashige and Skoog.
Le milieu de culture est ensuite stérilisé à l'autoclave sur un cycle de 20 minutes à 120°C.
Une fois le cycle d’autoclavage terminé, le milieu chaud (>60°C) est encore liquide. Il peut être versé immédiatement (attention aux brûlures) dans des boites de pétri (diam. 96mm) sur une hauteur de 5mm environ correspondant à 15mL.
Laisser le milieu refroidir et se solidifier. Il convient de travailler en condition stériles, de préférence sous un flux d'air horizontal (hotte à flux laminaire par exemple) et de laisser les boites légèrement entre-ouvertes, le temps du refroidissement, pour éviter la condensation à l'intérieur du couvercle.
Une fois le gel formé les graines sont déposées à sa surface. Les boites sont ensuite scellées avec du parafilm. A partir de ce moment il n'est plus nécessaire de travailler en conditions stériles.
Les boîtes sont placée dans un phytotron paramétré selon le cycle : 14 heures de luminosité 70% / température 25°C et 10 heures luminosité 0% / température 22°C.