Construction d'un électrophorèse pour faire migrer de l'ADN amplifié par PCR

Porteur du projet Emmanuel (contact : emmanuel.thiery@pmclab.fr)

Electrophorèse DIY http://www.instructables.com/id/Gel-electrophoresis-system-mini/?ALLSTEPS

- découpe laser (30×60 cm) (Ici trotec speedy 100) avec du plexiglace ou équivalent (3 mm d'épaisseur)

- imprimante 3D (Ici makerboot replicator 2X ou Ultimaker²) avec PLA ou ABS

un peignes 18 trous pour le gel trou 7,5 cm de longueur en plastique (imprimable en 3D) :

Du silicone pour assurer l'étanchéité

De la colle pour fixer solidement du plastique (ici du cynaoacrylate)

Openscad (gratuit))

2 banana plug

télécharger ces pdf et les découper avec la découpe laser:
lasercut_electro1.pdf
lasercut_electro2.pdf
lasercut_electro3.pdf
lasercut_electro4.pdf

• *Ou** ce fichier qui permet de faire un boitier beaucoup plus petit, ce qui permet d'utiliser moins de liquide :

https://drive.google.com/open?id=0B0XTckGV4ayPSmowZDBUZkpBYVE

découper également deux rectangles de 3×18 cm numérotés 13 et également un rectangle de 9,8×1,2 cm d'épaisseur noté 14

Imprimer à l'impression 3d ce code Openscad :

cube ([75,10,2]); // gros parallélépipède rectangle
 
difference() { // création des 18 dents
cube ([75,18,1]);
translate ([-2,10,-2]) cube ([5,10,4]);
translate ([5,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([9,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([13,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([17,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([21,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([25,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([29,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([33,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([37,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([41,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([45,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([49,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([53,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([57,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([61,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([65,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([69,10,-2]) cube ([2,10,4]);
translate ([73,10,-2]) cube ([6,10,4]);
 
}

Pour cela, copier coller ce code dans openscad, puis faite F6, puis exporter en format stl que vous ouvrirez avec le logiciel de votre imprimante 3D (ici makerboot replicator 2X)

Assembler les pièces avec la colle en vous aidant de ces images :


Percer les 4 pièces 12 afin de passer ultérieurement un fil électrique.

Mettre les fils et les coller avec de la colle classique (pistolet à colle par exemple).
Mettre les plug banana, souder l'intérieur
Mettre les plug banana, souder l'intérieur

Mettre du silicone dans les jointures, laisser sécher 2 heures environs. Puis, tester l'étanchéité en le remplissant d'eau. Si de l'eau s'écoule, rajouter du silicone au niveau de la formation des bulles

Mettre également du silicone sur les plaques 13

Coller le peigne en plastique sur 14 (ici 14 est en bois mais cela n'a pas d'importance).

L'idée est d'assembler de la manière suivante les 13 avec {8,11,12} avec un serre joint. Il faut que cette configuration soit étanche, car on va mettre le gel d'agarose liquide qui met environ 20 minute à ce solidifier.

1. Mettre les pièces 13 et {8,11,12} avec le serre joint comme sur la photo précédente, en n'oubliant pas de mettre le peigne. (le volume de migration est environ 50 mL, le volume total de l’électrophorèse est un peu en dessous d'un demi litre)
2. Couler le gel d'agarose.
3. Attendre 20 minutes.
4. retirer le serres joints et les 13 et mettre la boite comme indiquée sur la photo (photo à suivre)
5. remplir avec le TEA pour immerger le gel
6. Retirer le peigne
7. mettre l'adn dans les trous
8. brancher l'alim comme sur la photo
9. Attendre environ 10 minutes