Cet atelier est une introduction à la culture de plante in vitro. Il a pour objectif de faire germer des graines d'Arabidopsis thaliana, d'apprendre l'utilisation du matériel et les bons réflexes de laboratoire.

• Réalisation d'un milieu de culture
• Germination de plantes
• Utilisation du phytotron

Nous allons préparer un milieu de culture appelé Murashige and Skoog.

• 4,4 g de MS
• 5g de sucrose
• 10g d'agar-agar
• 1L d'eau distillée

Le milieu de culture est ensuite stérilisé à l'autoclave sur un cycle de 20 minutes à 120°C.

Une fois le cycle d’autoclavage terminé, le milieu chaud (>60°C) est encore liquide. Il peut être versé immédiatement (attention aux brûlures) dans des boites de pétri (diam. 96mm) sur une hauteur de 5mm environ correspondant à 15mL.

Laisser le milieu refroidir et se solidifier. Il convient de travailler en condition stériles, de préférence sous un flux d'air horizontal (hotte à flux laminaire par exemple) et de laisser les boites légèrement entre-ouvertes, le temps du refroidissement, pour éviter la condensation à l'intérieur du couvercle.

Une fois le gel formé les graines sont déposées à sa surface. Les boites sont ensuite scellées avec du parafilm. A partir de ce moment il n'est plus nécessaire de travailler en conditions stériles.

Les boîtes sont placée dans un phytotron paramétré selon le cycle : 14 heures de luminosité 70% / température 25°C et 10 heures luminosité 0% / température 22°C.