Un thermocycleur permet d'automatiser la réaction en chaîne de PCR (Réaction en chaîne par polymérase) qui consiste à répliquer des échantillons d'ADN afin d'obtenir un nombre de copie suffisant pour des manipulations ultérieurs. Les chercheurs utilise l'ADN “amplifié” pour insérer un gène dans un plasmide, faire du séquençage…
Voici un thermocycleur
Il existe des modèles de thermocycleur OpenSource et plus ou moins abordable selon leurs performances :
- L'OpenPCR : 452 euros avec les frais de port. C'est une PCR à monter soit même, qui permet de réaliser la réaction de PCR pour 16 échantillons
Le but de ce wiki est de construire un fabrication d'une machine à PCR (également connu sous “Thermocycleur”) . Cette outil est très utilisé par les biologistes répliquer l'ADN.
Son fonctionnement est très simple :
Les échantillons d'ADN sont mis dans des eppendorf avec des molécules necessaire à son amplification. Puis, ces eppendorf sont doivent passer par différent niveaux de températures et pendant des durées bien déterminées pour permettre l'amplification de l'ADN.
Inséré ici “fonctionnement_cycle_pcr”
Si on répète plusieurs fois ce cycle, on augmente exponentiellement la quantité d'ADN.
Plus précisément, quantité d'ADN finale est donc : 2n, avec n le nombre de cycle.
La page Wikipédia documente très bien la réaction de PCR et nous allons documenter la construction d'une telle machine.
- *3 Relay Module, w/Status LEDs, 5V-Controlled http://www.electrodragon.com/product/4-channels-relay-module/)
1.7*3=5.1$
- 3 sondes thermiques résistantes à l’eau DS18B20 (http://www.electrodragon.com/product/ds18b20-water-proof-probe-with-cable/) 2.5*3=7.5$
- 1 arduino ou similaire http://www.electrodragon.com/product/arduino-uno-r3/?added-to-cart=6067 9.64 €
- 2 servos moteurs, couple 4.7kg, vitesse 0.05s/60 degré , 7.4V (vous pouvez aussi essayer avec un moteur avec un couple moins important, mais la vitesse doit rester élever. Idéalement, choisir un moteur alimenté en 5 V) http://www.hobbyking.com/hobbyking/store/__44595__Corona_DS_319HV_Digital_Metal_Gear_Servo_4_2kg_34g_0_05s_EU_warehouse_.html 12.45*2=24.90$
- 3*0.70=2.1€
- 3 résistance 4.7Kohm
- des câbles électriques 18AWG de 3 couleurs différentes si possibles (matériels récupérés)
- un cable d’alimentation
- de l’acétone
- un breadbord avec des jumpers
- des gaines thermoretractables
- 1 câble usb sacrifiable
- 3 bassins ou casseroles
- 3 plaques chauffantes
Outils : - Un fer à souder avec son etain - une imprimante 3D qui encaisse l’ABS (nous avons utilisé la makerbootreplicator 2X
Impression de la gruePCR : à faire en premier et faire les autres parties pendant que l'impression des pièces.
Construire son alimentation 5 Volt 1 Ampère
Lire la température de 3 sondes thermiques DS18B20 à partir d'un arduino
Controler 3 relays avec un arduino
Fabrication d'une multiprise de 3 prises couplée à des relays
Construire un thermostats avec un arduino, 3 sondes et 3 relay
controler 2 servos moteurs
On mélange tout !