Spectrophotomètre Biochrom Libra

Manuel avancé d'utilisation du spectrophotomètre (en anglais) : https://www.aquaterra.hu/upload/document/catalog_data/21257/biochrom_libra_s50_s60_s70_s80_user_manual_v2.pdf 

INTRODUCTION AU SPECTROPHOTOMÈTRE BIOCHROM LIBRA S60

Le Biochrom Libra est un spectrophotomètre - dispositif optique conçu pour faire passer l'énergie lumineuse à travers un échantillon. La réduction de la transmission de l'énergie lumineuse et des pics d'absorbance correspondants sont utilisés pour déterminer la composition de l’échantillon ou, par comparaison avec des étalons de concentration connus, pour déterminer le concentration d'un échantillon.

Le Biochrom Libra permet des études dans la gamme de 190 à 1100 nm - c'est un spectrophotomètre UV/visible.

Description du spectrophotomètre

Le spectrophotomètre permet de mesurer plusieurs cuves simultanément. Sur la photo de gauche, on peut voir le compartiment où on place notre cuve d'échantillon à analyser à gauche. Sur la photo de droite, l'emplacement de la cuve la plus éloigné correspond à l'emplacement du blanc d'absorption. Les 5 autres compartiments correspondent à l'emplacement des cuves avec l'échantillon.

Il faut faire attention à l'emplacement des cuves et le sens du faisceau lumineux. Orientez le côté transparent de vos cuves sur le bord droit du spectrophotomètre. 

 

Fonctionnement de l'équipement:  Contrôles et indicateurs

L'indicateur en haut à gauche : LED USB indique que l'instrument enregistre sur la clé USB. La clé ne doit pas être retirée tant que ce voyant est allumé. 

L'indicateur en bas : état de l'instrument

• Orange - pendant le démarrage et la calibration
• Vert - l'instrument est allumé et a passé les tests de calibration de démarrage
• Rouge - l'instrument est allumé et a échoué aux tests de calibration de démarrage

Si le voyant sous l'écran est rouge au démarrage, rallumez la machine. Si le problème persiste, signalez l'anomalie à un membre du personnel. 

Comment utiliser le BIOCHROM LIBRA S60

    Démarrage

1. Commencez par allumer l'appareil. Appuyez sur le bouton d'alimentation à gauche de la machine au niveau du câble d'alimentation. Le spectrophotomètre effectuera ensuite une série de test pendant 5mn. Vous pouvez commencer à l'utiliser dès que le voyant sous l'écran apparait vert. Les meilleures performances sont obtenues si l'instrument est allumé pendant au moins 30 minutes avant d’être utilisé .

2. Reliez l'appareil à l'ordinateur. Rendez-vous sur le logiciel "Spectro" sur le bureau de l'ordinateur après avoir ouvert le spectrophotomètre. La connexion devrait se faire automatiquement.

3. Préparez les échantillons à blanc (des références)
   
4. Préparez les solutions des échantillons. La solution échantillon comprend normalement l'échantillon à tester dissous dans la solution de référence. Lorsque vous placez les cellules dans l'équipement, assurez-vous que la cellule est orientée de manière à ce que la lumière passera par la cellule.

Vous pouvez aussi directement utiliser l'interface du spectrophotomètre sans passer par l'ordinateur et extraire vos donnés directement du spectrophotomètre grâce au port USB présent sur le bord gauche de la borne de l'écran. De là vous pourrait confortablement poursuivre le traitement de vos donnés sur votre propre terminal. 

    Interface

Une fois la machine opérationnel, une fenêtre avec 6 icônes apparait. Pour effectuer vos mesures, appuyez sur l'icône  Applications, plusieurs options s'offre à vous : 

• • Longueur d'onde unique  Mesure l'absorbance à une longueur d'onde spécifique. 
    
  • Balayage de spectre Mesure l'absorbance entre 2 longueur d'onde choisi par l'utilisateur entre 190 et 1100 nm. 
    
  • Cinétique Mesure simultanément plusieurs absorbance sur le temps. 
    
  • Courbe étalon Mesure de la concentration à une longueur d'onde donné par la génération d'une courbe de calibration standardisé. 
    
  • Éditeur d'équation Méthode de mesure personnalisé.
•  

TEST

Pour effectuer un test du spectrophotomètre on peut utiliser l'érythrosine, qui est un colorant rouge de synthèse souvent utilisé comme standard dans des expériences de spectrophotométrie. Il est très soluble dans l'eau . Son pic d'absorbance est de 530 nm dans l'eau.

Matériel et Réactifs

1. Érythrosine (colorant alimentaire rouge)
2. Solvant ( l'eau distillée)
   
3. Cuves de spectrophotométrie et verrerie de laboratoire (béchers, fioles jaugées)

Préparation des Solutions

• Préparer la solution mère d'Érythrosine :

  • Dissolvez une quantité précise d'Érythrosine dans de l'eau distillée pour obtenir une concentration connue (on a mesuré 0,1066 g d'Érythrosine avec la balance de précision qu'on a dissout dans 10 mL de l'eau distillée ce qui a permis d’obtenir la concentration de 10,66 mg/mL).

• Préparer une série de solutions diluées et la solution de blanc : :

  • Préparez une série de 5 solutions de concentrations décroissantes (par exemple, on a pris des solutions de 1,066 mg/mL, 0.1066 mg/mL, et 0,01066 mg/mL) en diluant la solution mère. Ces solutions serviront à établir une courbe d'étalonnage.
  • Utilisez de l'eau distillée comme solution de blanc.

• Remplir les cuves :

  • Remplissez chaque cuve avec les différentes solutions préparées : une cuve pour la solution de blanc, et les autres cuves pour les solutions d'Érythrosine de différentes concentrations.

• Placer les cuves dans le spectrophotomètre :

  • Placez chaque cuve dans le compartiment de l'échantillon du spectrophotomètre

• Calibrer le spectrophotomètre :

  • Sélectionnez la longueur d'onde spécifique pour l'Érythrosine (on prend 525 nm, ce qui est proche au maximum d'absorption pour l'Érythrosine).
  • Utilisez la solution de blanc pour calibrer le spectrophotomètre en appuyant sur le bouton "Take Reference". Cela permettra d'établir la référence zéro.

Mesures et Analyse

1. Mesurer l'absorbance :

   • Mesurez l'absorbance des différentes solutions d'Érythrosine à la longueur d'onde sélectionnée. Notez les valeurs d'absorbance pour chaque concentration.

2. Établir une courbe d'étalonnage :

   • Tracez une courbe d'étalonnage en utilisant les valeurs d'absorbance en fonction des concentrations d'Érythrosine. La courbe devrait être linéaire dans la gamme de concentrations utilisées.

3. Analyse des échantillons inconnus :

   • Si vous avez des échantillons inconnus, mesurez leur absorbance en utilisant les mêmes conditions. Utilisez la courbe d'étalonnage pour déterminer la concentration d'Érythrosine dans ces échantillons.

En suivant ces étapes, vous pourrez effectuer des mesures précises et reproductibles de la concentration d'Érythrosine en utilisant un spectrophotomètre multi-cuve.

Note

• Pour votre sécurité, n'ouvrez pas la machine pendant utilisation.