Spectrophotomètre Biochrom Libra

Manuel avancé d'utilisation du spectrophotomètre (en anglais) : https://www.aquaterra.hu/upload/document/catalog_data/21257/biochrom_libra_s50_s60_s70_s80_user_manual_v2.pdf

INTRODUCTION AU SPECTROPHOTOMÈTRE BIOCHROM LIBRA S60

Le Biochrom Libra est un spectrophotomètre - dispositif optique conçu pour faire passer l'énergie lumineuse à travers un échantillon. La réduction de la transmission de l'énergie lumineuse et des pics d'absorbance correspondants sont utilisés pour déterminer la composition de l’échantillon ou, par comparaison avec des étalons de concentration connus, pour déterminer le concentration d'un échantillon.

Le Biochrom Libra permet des études dans la gamme de 190 à 1100 nm - c'est un spectrophotomètre UV/visible.

Description du spectrophotomètre

Le spectrophotomètre permet de mesurer plusieurs cuves simultanément. Sur la photo de gauche, on peut voir le compartiment où on place notre cuve d'échantillon à analyser à gauche. Sur la photo de droite, l'emplacement de la cuve la plus éloigné correspond à l'emplacement du blanc d'absorption. Les 5 autres compartiments correspondent à l'emplacement des cuves avec l'échantillon.

Il faut faire attention à l'emplacement des cuves et le sens du faisceau lumineux. Orientez le côté transparent de vos cuves sur le bord droit du spectrophotomètre.

Fonctionnement de l'équipement: Contrôles et indicateurs

L'indicateur en haut à gauche : LED USB indique que l'instrument enregistre sur la clé USB. La clé ne doit pas être retirée tant que ce voyant est allumé.

L'indicateur en bas : état de l'instrument

Orange - pendant le démarrage et la calibration
Vert - l'instrument est allumé et a passé les tests de calibration de démarrage
Rouge - l'instrument est allumé et a échoué aux tests de calibration de démarrage

Si le voyant sous l'écran est rouge au démarrage, rallumez la machine. Si le problème persiste, signalez l'anomalie à un membre du personnel.

Comment utiliser le BIOCHROM LIBRA S60

Démarrage

Commencez par allumer l'appareil. Appuyez sur le bouton d'alimentation à gauche de la machine au niveau du câble d'alimentation. Le spectrophotomètre effectuera ensuite une série de test pendant 5mn. Vous pouvez commencer à l'utiliser dès que le voyant sous l'écran apparait vert. Les meilleures performances sont obtenues si l'instrument est allumé pendant au moins 30 minutes avant d’être utilisé .
Reliez l'appareil à l'ordinateur. Rendez-vous sur le logiciel "Spectro" sur le bureau de l'ordinateur après avoir ouvert le spectrophotomètre. La connexion devrait se faire automatiquement.
Préparez les échantillons à blanc (des références)
Préparez les solutions des échantillons. La solution échantillon comprend normalement l'échantillon à tester dissous dans la solution de référence. Lorsque vous placez les cellules dans l'équipement, assurez-vous que la cellule est orientée de manière à ce que la lumière passera par la cellule.

Vous pouvez aussi directement utiliser l'interface du spectrophotomètre sans passer par l'ordinateur et extraire vos donnés directement du spectrophotomètre grâce au port USB présent sur le bord gauche de la borne de l'écran. De là vous pourrait confortablement poursuivre le traitement de vos donnés sur votre propre terminal.

Interface

Une fois la machine opérationnel, une fenêtre avec 6 icônes apparait. Pour effectuer vos mesures, appuyez sur l'icône Applications, plusieurs options s'offre à vous :

- Longueur d'onde unique Mesure l'absorbance à une longueur d'onde spécifique.
- Balayage de spectre Mesure l'absorbance entre 2 longueur d'onde choisi par l'utilisateur entre 190 et 1100 nm.
- Cinétique Mesure simultanément plusieurs absorbance sur le temps.
- Courbe étalon Mesure de la concentration à une longueur d'onde donné par la génération d'une courbe de calibration standardisé.
- Éditeur d'équation Méthode de mesure personnalisé.

TEST

Pour effectuer un test du spectrophotomètre on peut utiliser l'érythrosine et le vert de méthyle, qui sont des colorants de synthèse rouge et vert respectivement souvent utilisés comme standard dans des expériences de spectrophotométrie. Ils sont très soluble dans l'eau . Son pic d'absorbance est de 530 nm dans l'eau.

Matériel et Réactifs

Érythrosine (colorant alimentaire rouge) et le Vert de méthyle (colorant alimentaire vert)
Solvant ( l'eau distillée)
Cuves de spectrophotométrie et verrerie de laboratoire (béchers, fioles jaugées)

Préparation des Solutions

Préparer la solution mère d'Érythrosine :
- Dissolvez une quantité précise d'Érythrosine dans de l'eau distillée pour obtenir une concentration connue de la solution mère à 0,1 mg/mL .
Préparer une série de solutions diluées et la solution de blanc : :
- Préparez une série des solutions de concentrations décroissantes (par exemple, on a pris des solutions de 0,01 mg/mL, 0.001 mg/mL ) en diluant la solution mère. Ces solutions serviront à établir une courbe d'étalonnage.
- Utilisez de l'eau distillée comme solution de blanc.
Remplir les cuves :
- Remplissez chaque cuve avec les différentes solutions préparées : une cuve pour la solution de blanc, et les autres cuves pour les solutions d'Érythrosine de différentes concentrations.
Placer les cuves dans le spectrophotomètre :
- Placez chaque cuve dans le compartiment de l'échantillon du spectrophotomètre
Calibrer le spectrophotomètre :
- Utilisez la solution de blanc pour calibrer le spectrophotomètre en appuyant sur le bouton "Take Reference". Cela permettra d'établir la référence zéro.

Mesures et Analyses

Mode Balayage de spectre

Ce mode permet la mesure de l'absorbance ou du % de transmission d'un échantillon entre 2 longueurs d'onde choisi entre 190 et 1100 nm pour accéder à des longueurs d'onde maximales ou l'échantillon absorbe le plus fortement. C'est une des caractéristiques physiques les plus utiles d'un composé, à la fois comme moyen d'identification (analyse qualitative) et d’estimation (analyse quantitative).

PARAMÈTRES DE MESURE

Pour ce mode de mesure, sélectionnez l'option WAVESCAN parmi des applications. Utilisez Max Wavelength et Min Wavelength pour définir la plage de longueurs d'onde requise (pour des colorants on choisit la plage entre 400 nm et 800 nm ).

Vous pouvez passer à l'écran suivant à tout moment en appuyant sur la flèche avant et revenir à l'écran précédent en appuyant sur la flèche retour. Cet écran de paramètres de mesure permet à l'utilisateur de définir les paramètres suivants :

- - Feature Detection - Détection de caractéristiques (détermine le nombre de pics ou vallées)
  - Feature Type - Type de caractéristique (les options sont des pics ou des vallées)
  - Feature Sort - Tri des fonctionnalités : ( longueur d'onde ou amplitude)
  - Draw Peaks - Active et désactive l'affichage des curseurs de pic.
  - Custom Peak Height et Custom Peak Width: affiché uniquement si la détection des fonctionnalités est définie sur Personnalisé.

PRISE DE MESURE

Pour prendre une mesure, insérez une cuve contenant le solution de référence (de l'eau distillée) dans le porte-cuve de référence (en haut de l'appareil) et des cuves contenant l'échantillon dans les supports.

Attention : l'emplacement de l’échantillon numéro 1 est situé vers le bas de l'appareil.

Appuyez sur le bouton de prise de mesure. La mesure de référence sera automatiquement soustraite de la mesure de l'échantillon. L'écran affichera un tableau sous l'analyse. Ce tableau affichera le type de fonctionnalité sélectionné dans les paramètres de la méthode. Pour ajouter manuellement un pic ou une vallée au tableau, placez le curseur sur la caractéristique souhaitée en touchant la caractéristique ou en utilisant les curseurs gauche et droit et appuyez sur une cellule vide du tableau.

Note

Pour votre sécurité, n'ouvrez pas la machine pendant utilisation.