Spectrophotomètre Biochrom Libra

Manuel avancéavancé d'utilisation du spectrophotomèspectrophotomètre (en anglais) : https://www.aquaterra.hu/upload/document/catalog_data/21257/biochrom_libra_s50_s60_s70_s80_user_manual_v2.pdf 

INTRODUCTION AU SPECTROPHOTOMÈSPECTROPHOTOMÈTRE BIOCHROM LIBRA S60

Le Biochrom Libra est un spectrophotomèspectrophotomètre - dispositif optique conçconçu pour faire passer l'éénergie lumineuse àà travers un ééchantillon. La réréduction de la transmission de l'éénergie lumineuse et des pics d'absorbance correspondants sont utiliséutilisés pour dédéterminer la composition de l’él’échantillon ou, par comparaison avec des éétalons de concentration connus, pour dédéterminer le concentration d'un ééchantillon.

Le Biochrom Libra permet des éétudes dans la gamme de 190 àà 1100 nm - c'est un spectrophotomèspectrophotomètre UV/visible.

Description du spectrophotomèspectrophotomètre

Le spectrophotomèspectrophotomètre permet de mesurer plusieurs cuves simultanésimultanément. Sur la photo de gauche, on peut voir le compartiment oùoù on place notre cuve d'ééchantillon àà analyser àà gauche. Sur la photo de droite, l'emplacement de la cuve la plus éloignééloigné correspond àà l'emplacement du blanc d'absorption. Les 5 autres compartiments correspondent àà l'emplacement des cuves avec l'ééchantillon.

Il faut faire attention àà l'emplacement des cuves et le sens du faisceau lumineux. Orientez le côtécôté transparent de vos cuves sur le bord droit du spectrophotomèspectrophotomètre. 

Fonctionnement de l'ééquipement:  ContrôContrôles et indicateurs

L'indicateur en haut àà gauche : LED USB indique que l'instrument enregistre sur la cléclé USB. La cléclé ne doit pas êêtre retiréretirée tant que ce voyant est alluméallumé. 

L'indicateur en bas : éétat de l'instrument

• Orange - pendant le dédémarrage et la calibration
• Vert - l'instrument est alluméallumé et a passépassé les tests de calibration de dédémarrage
• Rouge - l'instrument est alluméallumé et a échouééchoué aux tests de calibration de dédémarrage

Si le voyant sous l'éécran est rouge au dédémarrage, rallumez la machine. Si le problèproblème persiste, signalez l'anomalie àà un membre du personnel. 

Comment utiliser le BIOCHROM LIBRA S60

    DéDémarrage

1. Commencez par allumer l'appareil. Appuyez sur le bouton d'alimentation àà gauche de la machine au niveau du câcâble d'alimentation. Le spectrophotomèspectrophotomètre effectuera ensuite une sésérie de test pendant 5mn. Vous pouvez commencer àà l'utiliser dèdès que le voyant sous l'éécran apparait vert. Les meilleures performances sont obtenues si l'instrument est alluméallumé pendant au moins 30 minutes avant d’êd’être utiliséutilisé .

2. Reliez l'appareil àà l'ordinateur. Rendez-vous sur le logiciel "Spectro" sur le bureau de l'ordinateur aprèaprès avoir ouvert le spectrophotomèspectrophotomètre. La connexion devrait se faire automatiquement.

3. PréPréparez les ééchantillons àà blanc (des référéférences)
   
4. PréPréparez les solutions des ééchantillons. La solution ééchantillon comprend normalement l'ééchantillon àà tester dissous dans la solution de référéférence. Lorsque vous placez les cellules dans l'ééquipement, assurez-vous que la cellule est orientéorientée de manièmanière àà ce que la lumièlumière passera par la cellule.

Vous pouvez aussi directement utiliser l'interface du spectrophotomèspectrophotomètre sans passer par l'ordinateur et extraire vos donnédonnés directement du spectrophotomèspectrophotomètre grâgrâce au port USB préprésent sur le bord gauche de la borne de l'éécran. De làlà vous pourrait confortablement poursuivre le traitement de vos donnédonnés sur votre propre terminal. 

    Interface

Une fois la machine opéopérationnel, une fenêfenêtre avec 6 icôicônes apparait. Pour effectuer vos mesures, appuyez sur l'icôicône  Applications, plusieurs options s'offre àà vous : 

• • Longueur d'onde unique  Mesure l'absorbance àà une longueur d'onde spéspécifique. 
    
  • Balayage de spectre Mesure l'absorbance entre 2 longueur d'onde choisi par l'utilisateur entre 190 et 1100 nm. 
    
  • CinéCinétique Mesure simultanésimultanément plusieurs absorbance sur le temps. 
    
  • Courbe éétalon Mesure de la concentration àà une longueur d'onde donnédonné par la génégénération d'une courbe de calibration standardiséstandardisé. 
    
  • ÉÉditeur d'ééquation MéMéthode de mesure personnalisépersonnalisé.
•  

TEST

Pour effectuer un test du spectrophotomèspectrophotomètre on peut utiliser l'éérythrosine et le vert de méméthyle, qui sont des colorants de synthèsynthèse rouge et vert respectivement souvent utiliséutilisés comme standard dans des expéexpériences de spectrophotoméspectrophotométrie. Ils sont trètrès soluble dans l'eau . Le pic d'absorbance de l'éérythrosine est de 530 nm dans l'eau.

MatéMatériel et RéRéactifs

1. ÉÉrythrosine (colorant alimentaire rouge)
   
2. Solvant ( l'eau distillédistillée)
   
3. Cuves de spectrophotoméspectrophotométrie et verrerie de laboratoire (bébéchers, fioles jaugéjaugées)

PréPréparation des Solutions

• PréPréparer la solution mèmère d'ÉÉrythrosine :

  • Dissolvez une quantitéquantité préprécise d'ÉÉrythrosine dans de l'eau distillédistillée pour obtenir une concentration connue de la solution mèmère àà 0,1 mg/mL .

• PréPréparer une sésérie de solutions diluédiluées et la solution de blanc : :

  • PréPréparez une sésérie des solutions de concentrations dédécroissantes (par exemple, on a pris des solutions de 0,01 mg/mL, 0.001 mg/mL ) en diluant la solution mèmère. Ces solutions serviront àà éétablir une courbe d'éétalonnage.
  • Utilisez de l'eau distillédistillée comme solution de blanc.

• Remplir les cuves :

  • Remplissez chaque cuve avec les diffédifférentes solutions préparépréparées : une cuve pour la solution de blanc, et les autres cuves pour les solutions d'ÉÉrythrosine de diffédifférentes concentrations.

• Placer les cuves dans le spectrophotomèspectrophotomètre :

  • Placez chaque cuve dans le compartiment de l'ééchantillon du spectrophotomèspectrophotomètre

• Calibrer le spectrophotomèspectrophotomètre :
  

  • Utilisez la solution de blanc pour calibrer le spectrophotomèspectrophotomètre en appuyant sur le bouton "Take Reference". Cela permettra d'éétablir la référéférence zézéro.

   

  PréPréparation de la solution aqueuse du vert de méméthyle

  MatéMatériel et réréactifs

  • Balance de préprécision
  • Pigment de vert de méméthyle
  • Eau distillédistillée
  • Pipettes
  • Fioles jaugéjaugées de 100 ml

  Protocole

  1. PeséPesée du pigment:

     • Peser préciséprécisément 10 mg de pigment de vert de méméthyle àà l'aide d'une balance de préprécision.

  2. PréPréparation de la solution mèmère:

     • Dissoudre les 10 mg de pigment dans 100 ml d'eau distillédistillée.
     • La concentration massique de cette solution mèmère est de 0,01 mg/ml.

  3. Dilution de la solution mèmère:

     • La solution obtenue est trètrès concentréconcentrée. Pour obtenir une solution moins concentréconcentrée, procéprocéder àà une dilution au dixièdixième.
     • PréPrélever 1 ml de la solution mèmère (0,01 mg/ml) et ajouter 9 ml d'eau distillédistillée.
     • La concentration de la solution diluédiluée est alors de 0,001 mg/ml.

  4. PréPréparation des solutions éétalons:

     • RéRéaliser des dilutions en sésérie pour obtenir une gamme de solutions avec des concentrations diffédifférentes àà partir de la solution mèmère.
     • Conserver les concentrations suivantes :
       • Solution mèmère : 0,01 mg/ml
       • PremièPremière dilution (C1) : 0,001 mg/ml
       • DeuxièDeuxième dilution (C2) : 0,0001 mg/ml

  Ces éétapes permettent de prépréparer des solutions de vert de méméthyle avec des concentrations préprécises pour diverses applications analytiques.

  
  

Mesures et Analyses

Mode WAVESCAN - Balayage de spectre 

Ce mode permet la mesure de l'absorbance ou du % de transmission d'un ééchantillon entre 2 longueurs d'onde choisi entre 190 et 1100 nm pour accéaccéder àà des longueurs d'onde maximales ou l'ééchantillon absorbe le plus fortement. C'est une des caractécaractéristiques physiques les plus utiles d'un composécomposé, àà la fois comme moyen d'identification (analyse qualitative) et d’d’estimation (analyse quantitative).

PARAMÈPARAMÈTRES DE MESURE 

Pour ce mode de mesure, sésélectionnez l'option WAVESCAN parmi des applications. Utilisez Max Wavelength et Min Wavelength pour dédéfinir la plage de longueurs d'onde requise (pour des colorants on choisit la plage entre 400 nm et 800 nm ).

Vous pouvez passer àà l'éécran suivant àà tout moment en appuyant sur la flèflèche avant et revenir àà l'éécran précéprécédent en appuyant sur la flèflèche retour. Cet éécran de paramèparamètres de mesure permet àà l'utilisateur de dédéfinir les paramèparamètres suivants :

• • • Feature Detection - DéDétection de caractécaractéristiques (dédétermine le nombre de pics ou vallévallées) 
    • Feature Type - Type de caractécaractéristique (les options sont des pics ou des vallévallées) 
    • Feature Sort - Tri des fonctionnalitéfonctionnalités : ( longueur d'onde ou amplitude)
    • Draw Peaks - Active et dédésactive l'affichage des curseurs de pic.
    • Custom Peak Height et Custom Peak Width: affichéaffiché uniquement si la dédétection des fonctionnalitéfonctionnalités est dédéfinie sur PersonnaliséPersonnalisé.
      

PRISE DE MESURE

Pour prendre une mesure, inséinsérez une cuve contenant le solution de référéférence (de l'eau distillédistillée) dans le porte-cuve de référéférence (en haut de l'appareil) et des cuves contenant l'ééchantillon dans les supports.

Attention : l'emplacement de l’él’échantillon numénuméro 1 est situésitué vers le bas de l'appareil.  

 

Appuyez sur le bouton de prise de mesure.mesure.

 

La mesure de référéférence sera automatiquement soustraite de la mesure de l'ééchantillon. L'éécran affichera un tableau sous l'analyse.analyse Ce tableau affichera le type de fonctionnalité sélectionné dansavec les paramèparamètres de la méthode.mésures. Pour ajouter manuellement un pic ou une vallévallée au tableau, placez le curseur sur la caractécaractéristique souhaitésouhaitée en touchant la caractécaractéristique ou en utilisant les curseurs gauche et droit et appuyez sur une cellule vide du tableau.

Mode SINGLE WAVELENGT - Longueur d'onde unique

L'application Single Wavelength permet d'effectuer des mesures simples d'absorbance (A) et de pourcentage de transmission (%T) sur des échantillons, en mesurant la quantité de lumière qui a traversé l'échantillon par rapport à la longueur d'onde par rapport à une référence.

PARAMÈTRES DE MESURE
Régler le mode sur Absorbance ou %T. La longueur d'onde, le temps d'intégration et le mode lampe peuvent être réglés selon les besoins. Le nom de l'échantillon (Sample Seed) saisi sous Sample sera le nom de fichier utilisé pour tout fichier de données sauvegardé automatiquement.

EFFECTUER UNE MESURE

Pour prendre une mesure, insérez une cuve contenant le solution de référence (de l'eau distillée) dans le porte-cuve de référence (en haut de l'appareil) et des cuves contenant l'échantillon dans les supports.  Appuyez sur le bouton de prise de mesure. La mesure de référence sera automatiquement soustraite de la mesure de l'échantillon.

L’écran affichera le paramètre mesuré sur votre échantillon (vérifier bien que le régime "monocuve" est choisi pour conduire la mesure sur un seul échantillon).

CONCENTRATION PAR FACTEUR

Ce mode de l'application Single Wavelength permet également d'effectuer des mesures de concentration simples sur des échantillons. La concentration est obtenue en multipliant l'absorbance mesurée à une longueur d'onde spécifique par un facteur. Le facteur peut être connu à l'avance ou peut être calculé par l'instrument en mesurant un étalon de concentration connue. Le cholestérol, le glucose et l'urée sont des exemples de mesures de concentration.

Utilisation du logiciel Spectro

Lancement
Une fois démarrédémarré, le logiciel devrait dédétecter  automatiquement le spectrophotomèspectrophotomètre Libra S60.
Si ce n'est pas le cas, allez dans le menu "ParamèParamètres" ou "Appareil" et sésélectionnez manuellement
le Libra S60 dans la liste des appareils disponibles.

Navigation

• Setup : Contient des boutons pour les tâtâches courantes (par exemple : copier, coller, options d'affichage des courbes, etc.).

• Applications : Affiche les diffédifférents types de mesure qu'il est possible de réréaliser

• User Methods 
• Help : Donne accèaccès au manuel détaillédétaillé sur l'utilisation du logiciel

Instructions pour la prise de mesure d'absorbance

MatéMatériel et réréactifs

Protocole

Note

• Pour votre sécuritésécurité, n'ouvrez pas la machine pendant utilisation.