System Gold™ HPLC instrument

PrincipeQu'est-ce deque l'HPLC : L'HPLC (High Performance Liquid Chromatography) est une technique de séséparation analytique et/ou préparatrice de molémolécules préprésentes dans un mélangeéchantillon, ce qui permet leur analyse qualitative et quantitative. Dans cette technique, une phase mobile (éluant) et une phase stationnaire (colonne) permettent la séparation des molécules d'un échantillon en fonction de différents critères. Elle est utilisée par de nombreuses industries, comme la pharmacie et la biopharmacie, l'alimentation, la cosmétique...

En fonction de la colonne et de l'éluant choisi pour l'analyse, le type de chromatographie peut différer. Voici certains des différents types de chromatographies que nous pouvons réaliser :

• Chromatographie d'adsorption
• Chromatographie de partage (la plus utilisée): 
  • En phase normale. Les phases mobile et stationnaire sont polaires
  • En phase inversée. La phase stationnaire est apolaire mais la phase mobile reste polaire
• Chromatographie par échange d'ions
• Chromatographie d'exclusion stérique (en fonction de la taille des molécules)

Il est important de se renseigner sur la compatibilité des solvants avec les colonnes avant de commencer une manipulation. Il est également nécessaires d'utiliser les bons éluants et colonnes en fonction des espèces pouvant être présentes dans un échantillon.

Description génégénérale

Le chromatographe HPLC que nous utilisons (Beckman Coulter System Gold) est une chaine composé de plusieurs sous blocs, chacun ayant une fonction qui lui est propre.

1) Pompe ou "Solvent Module" :

Le role de cette pompe est d'envoyer l'éluant (ou les éluants) sélectionné à travers la chaine de chromatographie. Le modèle que nous utilisons est le "Solvent Module 126". Il permet un mélange de plusieurs solvants, afin d'éviter à avoir à préparer nous meme un éluant au préalable.

Pompe "Solvent Module 126"

Les flacons de solvant sont placés en haut de la colonne et sont reliés à des pompes A et B, qui permettent un mélange des solvants avec les rapports qui nous intéressent. Le flux débité par la pompe est ensuite envoyé directement vers le deuxième bloc du système HPLC, c'est-à-dire l’échantillonneur automatique (Autosampler). Tous les paramètres permettant de contrôler la pompe (débit, pressions minimale et maximale, choix des solvants pour les pompes A et B, rapport A:B) sont modifiés depuis l’ordinateur. 

2) Échantillonneur automatique ou "Autosampler 507e"

NB : l’échantillonneur est détecté en tant que "Autosampler 507e" par le logiciel 32 Karat, même s'il se nomme en réalité "Autosampler 508".

Le role de l'échantillonneur et de réaliser automatiquement le prélèvement de différents échantillons préparés et placés au préalable dans des flacons 

 

 

 

 

 

 

 

Dans le cadre du systèsystème Beckman HPMC, l'ééchantillonneur automatique modèmodèle 507e peut êêtre contrôlécontrôlé par l'ordinateur exéexécutant le logiciel System Gold ou par le centre de contrôcontrôle du systèsystème intégréintégré au module de pompe àà solvant modèmodèles 118, 117 et 128. Communications entre le modèmodèle 507e et l'un ou l'autre systèsystème de contrôcontrôle et tout d'autres appareils comprenant un systèsystème HPLC (Pompe, DéDétecteur, ect) sont interconnectéinterconnectés via le Gold Bus. Un câcâble Gold Bud est livrélivré avec le modèmodèle 507e. La connexion de ce câcâble au systèsystème HPLC est dédécrite dans la section 2.

Cette section sera divisédivisée en deux parties, chaque partie traitant des spécificitéspécificités du systèsystème de contrôcontrôle utiliséutilisé. les deux systèsystèmes de contrôcontrôle seront identifiéidentifiés comme suit :

SystèSystème Gold

Le terme Gold System sera utiliséutilisé pour repréreprésenter le systèsystème nénécessitant un ordinateur et un logiciel systèsystème Gold pour contrôcontrôler le systèsystème HPLC en plus du modèmodèle 507e.

SystèSystème CSC

Le terme systèsystème SCC (stands pour System Control Center) sera utiliséutilisé pour repréreprésenter le systèsystème contrôlécontrôlé àà partir de la pompe modèmodèle 118, 127 ou 128. Ces pompes font partie intéintégrante du systèsystème HPMC en plus du modèmodèle 507e.

ÉÉtant donnédonné que les systèsystèmes Gold et SCC sont traitétraités en dédétail dans des manuels d'exploitation distincts, seuls les dédétails associéassociés au systèsystème

A) LES UNITÉUNITÉS

1. L'ordinateur : application GOLD-HPLC32 KARAT SOFTWARE

nbNB : Aucune connaissance informatique n'est requise. L'ordinateur n'a pas de mot de passe.

Le logiciel Gold, apporte 3 niveaux d'inter-actioninteraction et de contrôcontrôle  àà la chromatographie haute performance.

1. Gestionnaire pour 1 ou 2 systèsystèmes HPLC, repérérepérés SYSTEM1 ( carte PCI1 ) et SYSTEM2 ( carte PCI2 ) , chaque systèsystème pouvant contenir jusqu'àà 8 modules (pompes, dédétecteurs, interfaces etc...). Chaque systèsystème peut acquéacquérir le rérésultat àà deux longueurs d'onde), ces deux voies éétant appeléappelées CHANNEL A et CHANNEL B. En contrôcontrôle direct (direct control), ou en automatique au travers de méméthodes (edit method), l'ordinateur coordonne le fonctionnement de chacun des modules HPLC. Bien qu'il soit préprévu pour un fonctionnement avec des élééléments BECKMAN, il peut êêtre connectéconnecté àà d'autres élééléments au travers d'une interface (modèmodèle 405) permettant des contrôcontrôles par des contacts de relais et/ou le traitement du signal d'un dédétecteur.
2. Collecte les chromatogrammes des analyses effectuéeffectuées, les analyse, les transcrit en un rapport final, et/ou les stock, permettant ainsi un retraitement ultéultérieur. La calibration et les rérésultats des ééchantillons analyséanalysées sont réaliséréalisés facilement, le rapport final apparaîapparaît dans le format et avec les informations qui sont le plus appropriéappropriées.
3. Retrait des rérésultats (outil trètrès puissant). Chaque donnédonnée éétant stockéstockée en mémémoire (sur disque dur ou sur disquette), il permet de réréanalyser tout ééchantillon désirédésiré pour corriger des erreurs ou dédéterminer l'effet de calibrations diffédifférentes. La puissance des analyses chromatographiques et des fonctions de balayage en longueurs d'onde permet une éétude approfondie des rérésultats obtenus, non possible jusqu'àà préprésent.

Informations sur l'ordinateur àà disposition : 
- windows 2000 professionalProfessional 
- carte mèmère spéspécifique aux machines HPLC (les deux)
- ram : 4 giga
- Processeur : Itel(R) Pentium, (R) 4 CPU 3.20GHz, AT/AT COMPATIBLE, 3,135,980 KB RAM

2. Low temperature evaporative light scattering detector : Sexel Model 80

3. Spectrofluorometric detector : RF-10 Axl

SpectrofluoromèSpectrofluoromètre de face	ArrièArrière spectrofluoromèspectrofluoromètre
CôtéCôtés spectrofluoromèspectrofluoromètre	Dessous spectrofluoromèspectrofluoromètre

Principe de l'opération: 

Il y a trois étapes discrètes dans le fonctionnement du détecteur ; nébulisation du éluant, évaporation du solvant et détection du ou des composés d'intérêt : 

 

Liens

1. Manuel HPLC+software https://www.artisantg.com/info/Beckman_Coulter_Model_166_Manual.pdf dispo en papier
   
2. Manuel Foxy 200 https://archive-resources.coleparmer.com/Manual_pdfs/01471-xx.pdf dispo en papier
3. Manuel Sedex Model 80 https://www.knauer.net/Dokumente/detectors/third_party/manuals/sedere_elsd_80_manual__rev3.0__release.pdf dispo en papier

Autre manuel papier dispo :

1. Installation & Maintenance Guide HPLC 
   
2. P/ACE MDQ Basic Training Workbook
   

Un forum de FAQ https://www.labwrench.com/forums/equipment/155/beckman-coulter-system-gold