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LU3SV564 : Impact des pluies acides sur la population des bactéries du sol

INFORMATIONS

Problématique: Comment le pH des pluies urbaines influencent-ils la diversité, l'aspect et la croissance du bactérie du sol?

Séance 1: 05/11/2025

Objectif de la séance: Tester différent facteur de dilution

Liste du matériel :

-Pelle stérile 

-Contenants stériles

-Échantillon de terre

-15g d'Agar-Agar 

-20g de LB

-2L d'eau distillé 

-9g de NaCl 

-Tube de 50mL

-Micropipette

-20 Boites de pétries stériles

Ce qu'on a fait:

-Prélèvement d'échantillon de sol sur 3 zones différentes du site de Jussieu 

-Préparation du milieu LB: 15g d'Agar-Agar + 20g de LB pour 1L d'eau distillé 

-Préparation de l'eau physiologique: 9g de NaCl + 1L d'eau distillé

-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique, on l'appelle sol 1

-On a fait plusieurs dilution avec la sol 1:

  • dilution 1: 200µL de sol 1 + 25mL d'eau physiologique 
  • dilution 2: 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique 
  • dilution 3: 133µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
  • dilution 4: 100µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique

-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 20 boites de pétrie stérile 

-On a étaler 100µL dans 5 boites de pétrie pour chaque facteur de dilution 

-On a incubé a 30°C pendant 48h

Séance 2: 07/11/2025

Objectif de la séance: Choix du facteur de dilution et acidification du milieu

Liste du matériel :

-pH mètre

-Solution tampon à pH 4

-Acide chlorhydrique avec gant et lunette de protection 

-Pipette pasteur 

-15 Boites de pétries stériles

Ce qu'on a fait:

-Refusion du milieu LB

-On a tamponné les pH mètre à l'aide de la solution tampon pH 4

-On a mesuré d'abord le pH du milieu LB puis on a acidifié à l'aide de l'acide chlorhydrique jusqu'à atteindre un pH à 5,6

-On l'a coulé dans 5 boites de pétries stériles.

-On a répété ce processus pour un pH à 4 et à 3

Choix du facteur de dilution:

  • dilution 1: (photo)

 

  • dilution 2:

 

  • dilution 3: 

 

  • dilution 4: 

 

La dilution 2 a été sélectionné car plus comptable et observable

Séance 3: 13/11/2025

Objectif de la séance: Préparation de nouvelle boite de pétrie avec le facteur de dilution numéro 2

Liste du matériel :

-Échantillon de terre

-Eau physiologique préparée à la séance 1

-Milieu LB préparée à la séance 1

-6 Boites de pétrie stériles

Ce qu'on a fait:

-Refusion du milieu LB

-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique

-On a fait une dilution avec 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique

-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 6 boites de pétrie stériles

-On a étaler 100µL chaque boite de pétrie 

-On a incubé a 30°C pendant 24h

Séance 4: 14/11/2025

Objectif de la séance: Tamponner nos milieux acidifié

On a sélectionné cette boite de pétrie car c'est la plus exploitable

Liste du matériel :

 -Tampon

Ce qu'on a fait:

-On a tamponné nos milieux acidifié 

-On les a mis au froid pendant 4 jours car week-end entre temps 

Séance 5: 19/11/2025

Objectif de la séance: Observation des milieux 

Ce qu'on a fait:

-On a sorti les boites du froid pour les laisser a température ambiante 

Observation:

Très peu de bactéries sur nos boites a pH 5,6 et inexistante sur nos boites de pétrie a pH 4 et 3. Cela peut sans doute être du à une longue exposition au froid.

Séance 6: 21/11/2025

Objectif de la séance: Préparation d'un nouveau milieu LB

Liste du matériel :

-7,5g d'Agar-Agar 

-10g de LB

-500mL d'eau distillé 

Ce qu'on a fait:

-Préparation du milieu LB: 15g7,5g d'Agar-Agar + 20g10g de LB pour 1L500mL d'eau distillé 

Séance 7: 24/11/2025

Objectif de la séance: Répétition de nos expériences

Liste du matériel :

-Échantillon de terre

-Eau physiologique préparée à la séance 1

-Milieu LB préparée à la séance 1

-6 Boites de pétrie stériles

Ce qu'on a fait:

-Refusion du milieu LB

-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique

-On a fait une dilution avec 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique

-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 6 boites de pétrie stériles

-On a étaler 100µL chaque boite de pétrie 

-On a incubé à 30°C pendant 24h

Séance 8: 25/11/2025

Objectif de la séance: Répétition de nos expériences

Liste du matériel :

-pH mètre

-Solution tampon à pH 4

-Acide chlorhydrique avec gant et lunette de protection 

-Pipette pasteur 

-15 Boites de pétries stériles

-Tampon

Ce qu'on a fait:

-Refusion du milieu LB

-On a tamponné les pH mètre à l'aide de la solution tampon pH 4

-On a mesuré d'abord le pH du milieu LB puis on a acidifié à l'aide de l'acide chlorhydrique jusqu'à atteindre un pH à 5,6

-On l'a coulé dans 5 boites de pétries stériles.

-On a répété ce processus pour un pH à 4 et à 3

-Après gélification de nos milieux, on a tamponné à partir d'une boite de pétrie issue de la séance 7 qui selon nous est la plus exploitable: (photo)

-On les a incubé à 30°C pendant 24h

Séance 9: 26/11/2025

Objectif de la séance: Répétition de nos expériences

Observation de nos boites de pétries:

pH 5,6:(photo)

pH 4:

pH 3:

On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 5,6 il y a des bactéries qui s'y sont développées tandis que sur nos milieux à pH 4 et 3, il n'y a aucune bactérie visible 

Séance 10: 27/11/2025

Objectif de la séance: Répétition de nos expériences

Observation de nos boites de pétries:

pH 5,6:(photo)

pH 4:

pH 3:

On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 4 il y a de petites colonies individuelles de bactéries qui s'y sont développées tandis que sur nos milieux à pH 3, il y a toujours aucune bactérie visible.

Séance 11: 28/11/2025

Objectif de la séance: Répétition de nos expériences

Observation de nos boites de pétries:

pH 5,6:(photo)

pH 4:

pH 3:

On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 4, les petites colonies individuelles de bactéries observés à la séance 10 ont augmenté de volume(on va alors chercher à mesurer l'évolution de la surface de ces colonies durant ces 3 jours) tandis que sur nos milieux à pH 3, il y a toujours aucune bactérie visible. 

Liste de matériel:

-Iode, fuschine, éthanol et cristal violet

Ce qu'on a fait:

-Coloration de GRAM

Observation:

Bactéries issues d'une milieu à pH 5,6: (photo)

Bactéries issues d'une milieu à pH 4: (photo)

Séance 12: 05/12/2025

Objectif de la séance: Analyse des résultats

On a utilisé Mesurim2 pour mesurer la surface de nos colonies de bactéries et utilisé R pour tracer quelque graphe. Nous pensons plutôt à utiliser Python.

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