LU3SV564 : Impact des pluies acides sur la population des bactéries du sol
INFORMATIONS
- Hutan Thomas: thomashutan@gmail.com
- Emma Husson: emmahusson94@gmail.com
- Melody Schmitt: lpsmelody@yahoo.fr
- Clara Xiang: clara.ixe@hotmail.com
Problématique: Comment le pH des pluies urbaines influencent-ils la diversité, l'aspect et la croissance du bactérie du sol?
Séance 1: 05/11/2025
Objectif de la séance: Tester différent facteur de dilution
Liste du matériel :
-Pelle stérile
-Contenants stériles
-Échantillon de terre
-15g d'Agar-Agar
-20g de LB
-2L d'eau distillé
-9g de NaCl
-Tube de 50mL
-Micropipette
-20 Boites de pétries stériles
Ce qu'on a fait:
-Prélèvement d'échantillon de sol sur 3 zones différentes du site de Jussieu
-Préparation du milieu LB: 15g d'Agar-Agar + 20g de LB pour 1L d'eau distillé
-Préparation de l'eau physiologique: 9g de NaCl + 1L d'eau distillé
-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique, on l'appelle sol 1
-On a fait plusieurs dilution avec la sol 1:
- dilution 1: 200µL de sol 1 + 25mL d'eau physiologique
- dilution 2: 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
- dilution 3: 133µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
- dilution 4: 100µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 20 boites de pétrie stérile
-On a étaler 100µL dans 5 boites de pétrie pour chaque facteur de dilution
-On a incubé a 30°C pendant 48h
Séance 2: 07/11/2025
Objectif de la séance: Choix du facteur de dilution et acidification du milieu
Liste du matériel :
-pH mètre
-Solution tampon à pH 4
-Acide chlorhydrique avec gant et lunette de protection
-Pipette pasteur
-15 Boites de pétries stériles
Ce qu'on a fait:
-Refusion du milieu LB
-On a tamponné les pH mètre à l'aide de la solution tampon pH 4
-On a mesuré d'abord le pH du milieu LB puis on a acidifié à l'aide de l'acide chlorhydrique jusqu'à atteindre un pH à 5,6
-On l'a coulé dans 5 boites de pétries stériles.
-On a répété ce processus pour un pH à 4 et à 3
Choix du facteur de dilution:
- dilution 1:
(photo)
- dilution 2:
- dilution 3:
- dilution 4:
La dilution 2 a été sélectionné car plus comptable et observableobservable(même si la dilution 1 semble plus clair mais c'est due à un milieu LB mal préparé.
Séance 3: 13/11/2025
Objectif de la séance: Préparation de nouvelle boite de pétrie avec le facteur de dilution numéro 2
Liste du matériel :
-Échantillon de terre
-Eau physiologique préparée à la séance 1
-Milieu LB préparée à la séance 1
-6 Boites de pétrie stériles
Ce qu'on a fait:
-Refusion du milieu LB
-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique
-On a fait une dilution avec 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 6 boites de pétrie stériles
-On a étaler 100µL chaque boite de pétrie
-On a incubé a 30°C pendant 24h
Séance 4: 14/11/2025
Objectif de la séance: Tamponner nos milieux acidifié
On a sélectionné cette boite de pétrie car c'est la plus exploitableexploitable:
Liste du matériel :
-Tampon
Ce qu'on a fait:
-On a tamponné nos milieux acidifié
-On les a mis au froid pendant 4 jours car week-end entre temps
Séance 5: 19/11/2025
Objectif de la séance: Observation des milieux
Ce qu'on a fait:
-On a sorti les boites du froid pour les laisser a température ambiante
Observation:
Très peu de bactéries sur nos boites a pH 5,6 et inexistante sur nos boites de pétrie a pH 4 et 3. Cela peut sans doute être du à une longue exposition au froid.
Séance 6: 21/11/2025
Objectif de la séance: Préparation d'un nouveau milieu LB
Liste du matériel :
-7,5g d'Agar-Agar
-10g de LB
-500mL d'eau distillé
Ce qu'on a fait:
-Préparation du milieu LB: 7,5g d'Agar-Agar + 10g de LB pour 500mL d'eau distillé
Séance 7: 24/11/2025
Objectif de la séance: Répétition de nos expériences
Liste du matériel :
-Échantillon de terre
-Eau physiologique préparée à la séance 1
-Milieu LB préparée à la séance 1
-6 Boites de pétrie stériles
Ce qu'on a fait:
-Refusion du milieu LB
-On a pesé 1g de nos échantillons de sol mélangé et on l'a diluer dans 10mL d'eau physiologique
-On a fait une dilution avec 200µL de sol 1 + 50mL d'eau physiologique
-On a étaler 20mL de notre milieu LB dans 6 boites de pétrie stériles
-On a étaler 100µL chaque boite de pétrie
-On a incubé à 30°C pendant 24h
Séance 8: 25/11/2025
Objectif de la séance: Répétition de nos expériences
Liste du matériel :
-pH mètre
-Solution tampon à pH 4
-Acide chlorhydrique avec gant et lunette de protection
-Pipette pasteur
-15 Boites de pétries stériles
-Tampon
Ce qu'on a fait:
-Refusion du milieu LB
-On a tamponné les pH mètre à l'aide de la solution tampon pH 4
-On a mesuré d'abord le pH du milieu LB puis on a acidifié à l'aide de l'acide chlorhydrique jusqu'à atteindre un pH à 5,6
-On l'a coulé dans 5 boites de pétries stériles.
-On a répété ce processus pour un pH à 4 et à 3
-Après gélification de nos milieux, on a tamponné à partir d'une boite de pétrie issue de la séance 7 qui selon nous est la plus exploitable:
-On les a incubé à 30°C pendant 24h
Séance 9: 26/11/2025
Objectif de la séance: Répétition de nos expériences
Observation de nos boites de pétries:
pH 5,6:(photo)
pH 4:
pH 3:
On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 5,6 il y a des bactéries qui s'y sont développées tandis que sur nos milieux à pH 4 et 3, il n'y a aucune bactérie visible
Séance 10: 27/11/2025
Objectif de la séance: Répétition de nos expériences
Observation de nos boites de pétries:
pH 5,6:(photo)
pH 4:
pH 3:
On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 4 il y a de petites colonies individuelles de bactéries qui s'y sont développées tandis que sur nos milieux à pH 3, il y a toujours aucune bactérie visible.
Séance 11: 28/11/2025
Objectif de la séance: Répétition de nos expériences
Observation de nos boites de pétries:
pH 5,6:(photo)
pH 4:
pH 3:
On observe que sur nos milieux acidifiés à pH 4, les petites colonies individuelles de bactéries observés à la séance 10 ont augmenté de volume(on va alors chercher à mesurer l'évolution de la surface de ces colonies durant ces 3 jours) tandis que sur nos milieux à pH 3, il y a toujours aucune bactérie visible.
Liste de matériel:
-Iode, fuschine, éthanol et cristal violet
Ce qu'on a fait:
-Coloration de GRAM
Observation:
Bactéries issues d'une milieu à pH 5,6: (photo)
Bactéries issues d'une milieu à pH 4: (photo)
Séance 12: 05/12/2025
Objectif de la séance: Analyse des résultats
On a utilisé Mesurim2 pour mesurer la surface de nos colonies de bactéries et utilisé R pour tracer quelque graphe. Nous pensons plutôt à utiliser Python.