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Coloration de Gram

Méthode de Coloration de Gram

La coloration de Gram permetest une technique de coloration utilisée en biologiemicrobiologie moléculairepour de distinguerdifférencier les bactéries Gram+en (paroideux degroupes peptidoglycanesprincipaux, épaisse)appelés Gram-positives et Gram-négatives. (paroiLe principe de peptidoglycanescette fine),coloration mettrerepose en évidencesur les propriétésdifférences dans la composition de la paroi cellulaire des bactérienneries.

afin

Le critère principal qui détermine la différence entre les deux types de pouvoirbactéries distinguerest l'épaisseur de leur paroi cellulaire. Les bactéries Gram-positives ont une paroi cellulaire épaisse composée principalement de peptidoglycane, tandis que les bactéries Gram-négatives ont une paroi cellulaire plus mince composée de peptidoglycane et classerd'une membrane externe contenant du lipopolysaccharide.

Objectif :

Différencier les différentesbactéries populationsen fonction de microorganismes.la composition de leur paroi cellulaire.

Matériel nécessaire :

  1. Échantillon bactérien
  2. Cristal violet (solution violet de gentiane)
  3. Lugol (solution d'iode)
  4. Éthanol ou alcool éthylique
  5. Fuchsine (solution aqueuse de safran)

Procédure :

  1. Fixation de: Fixer les bactéries sur une lame de microscopeverre en les chauffant légèrement. Cela peut être fait en passant la lame au-dessus d'une flamme.

  2. RéactifColoration 1initiale : :Appliquer Gentianele cristal violet sur les bactéries. Laisser agir pendant environ 1 minuteminute.

    +
    3. nettoyage

  3. Fixation du cristal violet : Ajouter le Lugol (solution d'iode) sur le cristal violet. Laisser agir pendant environ 1 minute. Cette étape fixe le cristal violet dans la paroi cellulaire.

  4. Décoloration : Laver la lame à l'éthanol ou à l'alcool éthylique. Cela élimine le cristal violet des bactéries. La durée de décoloration doit être surveillée attentivement, car elle varie selon les types de bactéries.

  5. Contre-coloration : Appliquer la fuchsine sur les bactéries. Laisser agir pendant 1 minutes. La fuchsine colore les bactéries qui ont perdu le cristal violet.

  6. Lavage final : Rincer la lame à l'eau distilléepour éliminer l'excès de colorant.

  7. RéactifObservation 2: : Lugol 30 secondes + 3 à 5 gouttes d'alcool + nettoyage à l'eau distillée 

    Réactif 3 : Fuchsine 1 min + nettoyage à l'eau distillée 

    Le tout est à effectuer sur une grille au-dessus d'un box à javel. 

    Les bactéries Gram + apparaissent alors en violet etObserver les bactéries Gramau -microscope. enLes bactéries qui conservent la coloration violette sont appelées "Gram-positives", tandis que celles qui prennent la coloration safranine sont appelées "Gram-négatives".

Résultats :

  • Gram-positif : Bactéries avec une paroi cellulaire épaisse qui retient le cristal violet.
  • Gram-négatif : Bactéries avec une paroi cellulaire plus mince qui ne retient pas le cristal violet et prend la coloration rose.

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