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Tehcnique d'extraction ADN de cellules végétales

 

But :

 En biologie moléculaire, de nombreuses techniques se basent sur l'analyse et le traitement de l'ADN (Acide DesoxyriboNucléique), à ne pas confondre avec l'ARN (Acide RiboNucléique). 

C'est le cas de la Polymérase Chain Reaction (PCR), Southern Blot, utilisation d'enzymes de restriction, hybridation moléculaire...

Pour ce faire, il est nécessaire d'isoler l'ADN de son environnement (cellule, tissus) pour obtenir d'un échantillon pur et et quantité suffisante pour servir de base pour les techniques suivantes. 

 

Méthode classique : Fruit : oignon, banane, kiwi :

Protocole du département inforsciences Université libre de Bruxelles ULB :

https://hal.inrae.fr/hal-02628282/document 

Matériel

Oignon, banane ou kiwi : 1 (+/- 100 g)
Eau distillée : 100 ml
Sel de cuisine : 3 g
Produit vaisselle : 10 ml
Alcool (Éthanol 95 %) froid : 3 ml
Bleu de méthyle : quelques gouttes
Couteau & planche à découper
3 pipettes pasteur de 3 ml
1 tube à essai
1 porte tube à essai
1 entonnoir
1 filtre à café
1 erlenmeyer de 250 ml
1 béchers de 400 ml
2 verres de montre
1 cuillère en plastique
1 pince fine

Protocole : 

Technique d'extraction d'ADN génomique deet végétauxaplification permettantdes l’amplificationgènes dedactine longset fragmentscycline àD partirdes d'uneplantes petiteArabidopsis quantitéThaliana deet matériel.Tomates) https://hal.inrae.fr/hal-02628282/documentwww.unine.ch/files/live/sites/physiologievegetale/files/shared/documents/TP-PCR.pdf

Protocole :

  • Coupez une pièce de feuille (1-2cm2) dans un tube eppendorf
  • Broyez les feuilles fortement pendant 15 secondes.
  • Ajoutez 500 μL de tampons d’extraction
  • Vortex 5 secondes.
  • Centrifugez l’extrait pendant 5 minute a 13'000 rpm (4°C)
  • Prélevez 350 μl du surnageant dans un nouveau tube eppendorf
  • Ajoutez 350 μl d’isopropanol
  • Inversez le tube une dizaine de fois et laissez précipiter l’ADN pendant 2 min
  • Centrifugez pendant 15 min à 13'000 rpm (4°C)
  • Jetez le surnageant, ajoutez 400 μl d’ethanol 80%.
  • Centrifugez pendant 5 min à 13'000 rpm
  • Enlevez le surnageant et laissez sécher le culot (10min environ)
  • Ajoutez 50 μl d’ H2O distillé
  • Vortex

VOrtex : matériel utilisé en bilogie moléclaire pour mélanger des solutions notamment dans les microtubes. Il est composé d'un socle lourd ou se situe le moteur de '

 


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