Méthode ELISA (Enzyme-Linked Immuno Assay)

Principe :

La méthode ELISA consiste enà ladoser détectionvisuellement d'une molécule spécifiqueprésente dans une solution dont: laun composition n'est pas entièrement connue.anticorps. Pour faire simple : on choisit une molécule capable de se lier avec celle qu'on recherche,veut puisdoser : l'antigène, qu'on ladépose fixedans surun unebain surface./ Onun applique sur cette même surface la solution inconnue.puits. On ajoute ensuite unedans ce même bain la solution "révélatrice"contenant l'anticorps. Les antigènes et les anticorps vont alors se lier. On prend soin d'ailleurs de rincer le support entre chaque manipulation pour enlever l'excédent d'anticorps appliqué.  Généralement, on intègre un deuxième anticorps capable de produire de la couleur ou de la lumière (couleur,grâce phosphorescence.à une enzyme)..) desEnfin, couplesl'ajout formés.d'un substrat permet de provoquer la réaction lumineuse. La concentration en couleur perçue (à l’œil, au microscope, au colorimètre ou au spectrophotomètre...) permet alors directement de :

• conclure sur la présence ou non de la substance recherchéel'anticorps dans la solution inconnuetestée
  
• obtenir une estimation (plus ou moins précise) de la concentration de cettecet substanceanticorps (enpeut ayantdemander de réaliséaliser une gamme étalon au préalable)

On appellera alors les deux molécules se liant comme un anticorps et un antigène.

Applications :

Détection COVID-19, VIH,..

Définitions :

1. Antigènes : toute substance reconnue comme étrangère par notre système immunitaire
2. Anticorps : protéine capable de réagir avec un antigène
3. Substrat : le plus souvent une substance solide support d'un réactif
   

Matériel :

• Plaques 96 puits à fond plat

Procédures :

Il existe 4 versions différentes de la méthode ELISA en fonction de la précision recherchée et du contexte du test (approche quantitative ou qualitative).

• ELISA Direct

Fonctionnement :

La méthode Direct n'utilise pas d'intermédiaire entre l'anticorps et l'antigène. On applique l'un sur l'autre puis on ajoute un "substrat chromogène", c'est à dire un révélateur qui permet de savoir si des antigènes ont été retenus.

Procédure :

1. Fixer les anticorps (ou les antigènes selon le test souhaité). Ceci peut être fait soit par absorption par un support, soit en créant des liaisons covalentes (c'est à dire ?)
   

• ELISA Indirect

 

• ELISA Sandwich

 

• ELISA Competition

Sources :

WikipédiaPasseport Santé

Microbiologynote