Méthode ELISA (Enzyme-Linked Immuno Assay)
Principe- :Présentation -
La méthode ELISA consiste à doser visuellement une molécule présente dans une solution : un anticorps. Pour faire simple : on choisit une molécule capable de se lier avec celle qu'on veut doser : l'antigène, qu'on dépose dans un bain / un puits. On ajoute ensuite dans ce même bain la solution contenant l'anticorps. Les antigènes et les anticorps vont alors se lier. On prend soin d'ailleurs de rincer le support entre chaque manipulation pour enlever l'excédent d'anticorps appliqué. Généralement, on intègre un deuxième anticorps capable de produire de la couleur ou de la lumière (grâce à une enzyme). Enfin, l'ajout d'un substrat permet de provoquer la réaction lumineuse. La concentration en couleur perçue (à l’œil, au microscope, au colorimètre ou au spectrophotomètre...) permet alors directement de :
- conclure sur la présence ou non de l'anticorps dans la solution testée
- obtenir une estimation (plus ou moins précise) de la concentration de cet anticorps (peut demander de réaliser une gamme étalon au préalable)
Applications :
Détection COVID-19, VIH,..
Définitions :
- Antigènes : toute substance reconnue comme étrangère par notre système immunitaire
- Anticorps : protéine capable de réagir avec un antigène
- Substrat : le plus souvent une substance solide support d'un réactif
Matériel :
- Plaques 96 puits à fond plat
- Les différentes versions -
Il existe 4 versions différentes de la méthode ELISA en fonction de la précision recherchée et du contexte du test (approche quantitative ou qualitative).
-
ELISA Direct
Fonctionnement :
La méthode Direct n'utilise pas d'intermédiaire entre l'anticorps et l'antigène. On applique l'un sur l'autre puis on ajoute un "substrat chromogène", c'est à dire un révélateur qui permet de savoir si des antigènes ont été retenus.
Procédure :
- Fixer les anticorps (ou les antigènes selon le test souhaité). Ceci peut être fait soit par absorption par un support, soit en créant des liaisons covalentes (c'est à dire ?)
-
ELISA Indirect
-
ELISA Sandwich
-
ELISA Competition
Sources :