Réalisation d'un protocole HPLC
https://fr.wikipedia.org/wiki/Chromatographie_en_phase_liquide_%C3%A0_haute_performance
https://link.springer.com/article/10.1007/s11046-020-00514-0
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S002196730183404X
protocole simple avec colonne C18, phase mobile eau ou acétonitrile, pour HPLC
taille de la colonne disponible au Fablab.
C18 = une type de colonne = RP = revert phase
Comment cela fonctionne ?
Réactifs :
- Caffeine reference standard, Sigma-
Aldrich; - Acetonitril, HPLC grade, Sigma-
Aldrich; - Ultra pure water;
- Test samples – caffeine containing
food supplements.
Matériels :
- Varian Pro Star HPLC system,
- détecteur UV
- colonne C18, 4.6 mm
- thermostat,
- bain à ultrason
- seringue Hamilton conçue pour injection manuelle dans les ports HPLC (25mcl).
Conditions expérimentales : la chromatographie s'effectue en phase mobile
avec 65% d'eau et 35% acétonitrile et les paramètres suivants :
- Détection UV : 274 nm,
- Débit : 1 ml/min,
- Colonne : C18,
- Température thermostat : 25°C.
Préparation des solutions standards :
Dilution dans une solution d’acétonitrile/eau pendant 15 min dans un bain à ultrason.
Préparation des échantillons tests :La1. préparation des échantillons comprenait une extractionExtraction avec de l'acétonitrile/eau, une ultrasonication dans un bain à ultrasons pendant 15 minutes.
Toutes2. Filtration deux fois pour toutes les solutions: d'essai
été- filtrées deux fois. La première étape comprenait une préPréfiltration pour éliminer les grosses particules des solutions. La
- Filtration plus fine a été réalisée avec des filtres à seringue (taille des pores 0,45 μm). Tous
3. Analyse de tous les échantillons ont été analysés en triplicata.