Réalisation d'un protocole HPLC
Bibliographie
https://fr.wikipedia.org/wiki/Chromatographie_en_phase_liquide_%C3%A0_haute_performance
https://link.springer.com/article/10.1007/s11046-020-00514-0
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S002196730183404X
protocole simple avec colonne C18, phase mobile eau ou acétonitrile, pour HPLC
taille de la colonne disponible au Fablab.
C18 = une type de colonne = RP = revert phase
Comment cela fonctionne ?
Réactifs :
- Caféine comme réference standard
- Acétonitrile
- Eau ultra pure;
- Échantillons tests– supplément alimentaire à base de caféine.
Matériels :
- Varian Pro Star HPLC system,
- détecteur UV
- colonne C18, 4.6 mm
- thermostat,
- bain à ultrason
- seringue Hamilton conçue pour injection manuelle dans les ports HPLC (25mcl).
Conditions expérimentales :
La chromatographie s'effectue en phase mobile
avec 65% d'eau et 35% acétonitrile et les paramètres suivants :
- Détection UV : 274 nm,
- Débit : 1 ml/min,
- Colonne : C18,
- Température thermostat : 25°C.
Préparation des solutions standards :
Dilution dans une solution d’acétonitrile/eau pendant 15 min dans un bain à ultrason.
Préparation des échantillons tests :
1. Extraction avec de l'acétonitrile/eau, une ultrasonication dans un bain à ultrasons pendant 15 minutes.
2. Filtration deux fois pour toutes les solutions:
- Préfiltration pour éliminer les grosses particules des solutions.
- Filtration plus fine avec des filtres à seringue (taille des pores 0,45 μm).
3. Analyse de tous les échantillons en triplicata.
Peser la capsule pour avoir son poids exacte
Réduire la capsule alimentaire à analyser sous forme de poudre.
Dans un bécher de 50 ml, dissoudre la poudre obtenue dans la phase mobile acétonitrile:eau 35:65
Filtrer sous Buchner.
Récupérer le filtrat et le diluer dans la phase mobile en proportion 100/200
Injecter 20 mcl de la solution dans l'appareil HPLC à l'aide d'une seringue Hamilton de 25 mcl
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