Transfert de protéine semi-sec sur membrane

L'immunobuvardage est une technique servant à détecter une protéine. Pour pouvoir réaliser l'immunobuvardage, il est nécessaire dans un premier temps de séparer les protéines présentes au sein du gel et de les transférer sur une membrane. La machine présenté ci-dessous permet de réaliser ces deux tâches.

La séparation des protéines se fait par Electrophorèse. Sous l'effet d'un champs électrique, la séparation des particules se fait en fonction de leur charge et/ou de leur taille. Justement, cet outil permet de créer ce champs électrique.

Utilisation :

• déposer deux filtre papier entre les deux plaques
• entre les deux papier, déposer la membrane sur laquelle les protéines vont être transférés ainsi que le gel

• bracher la plaque du haut à la borne négative d'un générateur (i.e la masse) et la plaque d'en dessous à la borne positive du générateur.
  Attention : il faut faire attention à ne pas dépasser la tension maximal qui est de 200 volts DC (direct current) et le courant qui est de 200 mA. Voici une formule du champ électrique vous permettant d'ajuster la tension afin d'avoir le champ souhaité : E = |U|/d
  d : distance entre les deux plaques
  U : tension parcourant les deux plaques

  
  

Le temps de la manipulation peut varier selon le type de gel et de la membrane utilisé.