Réalisation d'un protocole HPLC

https://fr.wikipedia.org/wiki/Chromatographie_en_phase_liquide_%C3%A0_haute_performance

https://link.springer.com/article/10.1007/s11046-020-00514-0 

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S002196730183404X

protocole simple avec colonne C18, phase mobile eau ou acétonitrile, pour HPLC

taille de la colonne disponible au Fablab.

C18 = une type de colonne = RP = revert phase

Comment cela fonctionne ? 

https://www.researchgate.net/publication/341152830_HPLC_Method_for_Determination_of_Caffeine_in_Food_Supplements_for_Weight_Loss

Réactifs :

• Caféine comme réference standard, Sigma-
  Aldrich;standard
• Acétonitrile, HPLC grade, Sigma-
  Aldrich;tonitrile
• Eau ultra pure;
• Échantillons tests– supplément alimentaire à base de caféine.

Matériels :

• Varian Pro Star HPLC system,
• détecteur UV
• colonne C18,  4.6 mm
• thermostat,

• bain à ultrason 
• seringue Hamilton conçue pour injection manuelle dans les ports HPLC (25mcl).
  

Conditions expérimentales : la chromatographie s'effectue en phase mobile
avec 65% d'eau et 35% acétonitrile et les paramètres suivants : 

• Détection UV : 274 nm,
• Débit : 1 ml/min,
• Colonne : C18,
•  Température thermostat : 25°C.

Préparation des solutions standards :

Dilution dans une solution d’acétonitrile/eau pendant 15 min dans un bain à ultrason.

Préparation des échantillons tests :
1. Extraction avec de l'acétonitrile/eau, une ultrasonication dans un bain à ultrasons pendant 15 minutes. 

2. Filtration deux fois pour toutes les solutions: 

    - Préfiltration pour éliminer les grosses particules des solutions.

    - Filtration plus fine avec des filtres à seringue (taille des pores 0,45 μm). 

3. Analyse de tous les échantillons en triplicata.