Electrophorèse

Intro:

Le Fablab possède 2 types de machines pour l'électrophorèse:

-Kits PCR (thermocycleurs, électrophorèses horizontales)

-Kits Western Blotting (électrophorèse verticales pour migration et transfert)

Elles permettent aux utilisateurs de pouvoir respectivement :

-réaliser une PCR électrophorèse d'ADN sur gel d'agarose afin de comparer l'ADN avant réplication par PCR et l'ADN obtenu

-réaliser une migration verticale sur gel de polyacrylamide

I- Principe générale de l'électrophorèse

L’électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire utilisée en génétique pour séparer des mélanges contenant de l’ADN, de l’ARN et d’autres protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaire respectives.

Horizontale:

Le gel (d'agarose) est orienté de manière horizontale et est immergé dans un tampon.  Une extrémité contient une anode et l’autre une cathode. Lorsqu'un courant est appliqué, le gel chauffe et le tampon le refroidit.

L’électrophorèse horizontale sur gel est une méthode sans effort utilisée dans la séparation de l’ADN et de l’ARN

Verticale:

Plus complexe elle utilise un tampon discontinudiscontinu. La cathode est située dans la chambre supérieure et l’anode dans la chambre inférieure.  Les électrodes présentes dans chaque compartiment fournissent le champ électrique requis.Une fine couche de gel est versée entre les deux plaques de verre montées. Par conséquent, la partie supérieure du gel est immergée dans la chambre supérieure et la partie inférieure du gel est immergée dans la chambre inférieure. Une fois le courant appliqué, une petite partie du tampon se déplace vers la chambre inférieure de la chambre supérieure à travers le gel.

En raison de la taille plus petite des pores du gel d’acrylamide, une séparation précise peut être obtenue avec une résolution plus élevée.