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Bioluminescence en fonction de chaque paramètre

1) Protocole expérimental 

  • On a lancé des cultures avec la suspension mère du 09/05/2025
  • Pour ce faire on a mis : 200µL de la suspension mère dans 10mL de milieu.  

image.png               image.png

On a laissé incuber les cultures 16h à température ambiante dans la réserve. On a ensuite transféré 250µL dans les puits des microplaques. On a ensuite mesuré la bioluminescence exprimé en RLU ( Relative light unit) avec le lecteur de plaque luminomètre BertholdTech TriStar2S.    

image.png                                        image.png

2) Résultats

Echantillon  Mesure 1 (RLU)  Mesure 2 (RLU)  Mesure 3 (RLU)  moyenne
Sel marin 

44845504

46015056 46768168 45 876 243
NaCl 10g/L 235183 112455 1790293 712643,6667
NaCl 20 g/L 60977620 60070600 58558968 59869062,67
NaCl 30 g/L Overload Overload Overload  
NaCl 40 g/L Overload Overload Overload

image.png                                                                           Figure 1 : La bioluminescence en fonction de la concentration de la NaCl

Echantillon  Mesure 1 (RLU)  Mesure 2 (RLU)  Mesure 3 (RLU)  moyenne 
Sans glycérol  33247172 32239560 33735476 33074069,33
Glycérol 3g/L 42860224 42131648 40296944 41762938,67
Glycérol 4g/L 45816200 45822756 47212044 46283666,67
Glycérol 5g/L 30895180 31607086 32870984 31791083,33
Glycérol 6g/L 46946548 43893304 43641736 44827196

image.png                                                                            Figure 2 : La bioluminescence en fonction de la concentration du glycérol 

Echantillon Mesure 1 (RLU)  Mesure 2 (RLU)  Mesure 3 (RLU)  moyenne 
Sans asparagine  32419202 35136032 31284540 32946591,33
Asparagine 20g/L Overload Overload Overload Overload
Asparagine 30g/L 62468408 58194472 59331008 59997962,67
Asparagine 40g/L Overload Overload Overload Overload
Asparagine 50g/L Overload 62883208 49083528 /

image.png                                                                      Figure 3 : La bioluminescence de la bactérie en fonction de la concentration en asparagine 

Echantillon Mesure 1 (RLU)  Mesure 2 (RLU)  Mesure 3 (RLU)  moyenne
Sans tryptone  31655116 32114984 30762482 31510860,67
Tryptone 20g/L 39209212 39168668 43397976 40591952
Tryptone 30g/L 51469600 57521668 57203196 55398154,67
Tryptone 40g/L 44447328 47998668 47332372 46592789,33
Tryptone 50g/L 42574080 43918224 40970844 42487716

image.png                                                               Figure 4 : La bioluminescence de la bactérie en fonction de la concentration de tryptone. 

3) Discussion

Nous avons obtenu des valeurs globalement très élevé en URL ( de l'ordre de 10^7 URL) alors que dans la littérature c'est dans l'ordre de 10^6 . Il faut préalablement dilué nos échantillons et mettre un volume plus petit (150-200µL) pour pouvoir quantifier la bioluminescence et éviter la surcharge. De plus, il faut faire un témoins négatif (eau distillé) pour avoir une valeur de référence sans bioluminescence. les conditions favorables pour la bioluminescence de la bactérie c'est 20g/L d'asparagine, 30gl/L de NaCl, 30g/L de tryptone et 4g/L de glycérol ce qui correspond à ce que l'on voit dans la littérature. Pour le NaCl, on observe qu'à 10g/L, il n'y a aucune bioluminescence mais à partir de 20g/L, la bioluminescence est plus élevée qu'avec le sel marin . Pour le glycérol , il semblerait qu'une concentration à 4g/L et légèrement plus favorable à la bioluminescence qu'à 3g/L. Nous avons observé préalablement qu'entre 0 et 10g/L d'asparagine, il n'y a pas d'influence sur la bioluminescence. En revanche, 20g/L d'asparagine suffit pour voir une intensité nettement plus élevée de la bioluminescence.